桑黄提取精制工艺的研究.docVIP

　　桑黄提取精制工艺的研究 作者：戈延茹，张春燕，姜树红 【摘要】 　　目的优选桑黄多糖的提取、精制工艺。方法采用正交实验设计优选桑黄多糖提取工艺。通过吸附法与醇沉法的比较，选出最佳精制工艺。结果桑黄多糖最佳提取工艺为：粉碎粒度60目，浸泡12 h，用14倍的水，提取3 h，用壳聚糖吸附法精制多糖。结论浸泡时间对实验影响较大，采用壳聚糖吸附法精制，多糖损失少，此提取精制工艺方法可行。 【关键词】 桑黄； 多糖； 正交设计； 提取； 精制 　　Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction and purification method of the polysaccharide of Phellinus igniarius.MethodsThe bset extract method of the polysaccharide ined by orthogonal design. Through the parison of the ethanol extraction and adsorbing purification, the best purification method ethod of the polysaccharide in the Phellinus igniarius esh,the immersion time aterial 14:1, and extracted 3 times . Chitosan absorbing purification mersion time greatly influenced the extraction of Phellinus igniarius .Chitosan absorbing purification g ，置250 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100. 4 μg/ ml 标准葡萄糖溶液备用。 　　5%苯酚试剂的配制：称取蒸馏后苯酚7. 5 g ，加水150 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。 　　标准曲线的绘制：精确量取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.5,0.7,0.9 ml 置干燥试管中分别再加水使其成1.0 ml，再分别加入5 %苯酚溶液2.0 ml ，摇匀。然后加浓H2SO47.0 ml ，充分摇匀，室温放置25 min ，在490 nm 处测定其最大吸光度，同时做一空白。以吸光度对葡萄糖浓度线性回归，得回归方程为Y＝0.063 4X+0.010 4(r＝0.992 2，n＝6)。实验表明，葡萄糖在0.91～9.16 μg/ml范围内呈现良好的线性关系。见图1。 　　图1 标准曲线（略） 　　2.1.2 样品测定样品经处理后(供试品溶液的制备)，移至250 ml容量瓶中，定容，摇匀，精确吸取2 ml到25 ml容量瓶，定容，摇匀成为样品液。测定时，精确吸取样品液1 ml ，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式 计算 多糖含量：　　 　　多糖含量（%） = CD/ l) ；D为样品溶液的稀释倍数，W为生药的重量(μg) 。 　　2.2 桑黄多糖提取工艺的选择 　　2.2.1 制定考察因素与水平［5］据 　　2.3 桑黄多糖精制工艺的选择［6，7］ 　　2.3.1 药材的提取取桑黄药材100 g,按最佳提取方案提取，提取液过滤，合并滤液，浓缩至400 ml，定容到500 ml容量瓶中备用。 　　2.3.2 水提液的制备取3份药材提取液，每份1 ml，置250 ml容量瓶中，定容即得水提液供试品。用“2.1.2”项条件测定多糖的含量，重复做3次。结果见表4所示。 　　表4 最优方案所得多糖含量（略） 　　2.3.3 醇沉法精制取3份药材提取液，每份10 ml，分别加入95%乙醇，使乙醇浓度达到70%，冰箱内静置24 h，然后过滤，滤液再加入95%乙醇，使乙醇浓度达到90%，冰箱内静置24 h，过滤，滤渣水溶解，定容至50 ml容量瓶中，精密吸取2 ml置50 ml容量瓶中，定容至刻度，即得醇沉法供试液。用“2.1.2”项条件测定多糖的含量，重复做3次。 　　2.3.4 壳聚糖吸附法精制壳聚糖吸附剂的配制：将壳聚糖用1%醋酸配成1%溶液。壳聚糖吸附剂的用量确定：取20份桑黄水提液，每份5 ml，分别加入壳聚糖吸附剂 5，10，15，20，25，30，……100 d，结果加入壳聚糖吸附剂25 d时澄明度最好。壳聚糖吸附法精制工艺：取3份桑黄，每份25 ml，分别加入壳聚糖吸附剂 125 d，置60℃的水浴上加热并以搅拌速度为100 r/min的搅拌15 min，放置至澄清为止，过滤，滤液置100 ml容量瓶中定容至刻度，精密称取1 ml置25 ml容量瓶中，