桔皮中总黄酮的微波超声辅助协同提取工艺研究.docVIP

　　桔皮中总黄酮的微波超声辅助协同提取工艺研究 作者：张丽珍，周之荣，王群，章淑媛 【摘要】 目的对微波-超声辅助提取桔皮中总黄酮的工艺条件及参数进行优化。方法在单因素实验的基础上, 采用L9(34)正交设计，以桔皮总黄酮提取率为指标，探讨料液比、提取温度、提取时间、乙醇浓度对提取率的影响。结果最佳提取工艺参数为: 提取温度80 ℃、提取时间60 min、乙醇浓度φ=60 %、料液比1∶40。结论采用微波-超声辅助协同提取桔皮中总黄酮工艺简单可行，是提取桔皮中总黄酮的有效工艺之一。用于提取桔皮中的总黄酮，结果满意，回收率为98.6 %～102.3 %, RSD为1.6 %。 【关键词】 桔皮； 总黄酮； 微波-超声辅助协同提取； 正交实验 　　柑桔为芸香科柑桔属植物，其干燥果皮为药材陈皮，具有理气健脾、燥湿化痰作用。近年来研究表明，桔皮含有丰富的黄酮类物质，黄酮类化合物是 自然 界中广泛存在的一类天然产物，药 理学 研究表明其具有抗炎［1］、抗氧化［2，3］、抗过敏作用［4］以及降低血液和肝脏中胆固醇的作用［5］。 　　提取桔皮中总黄酮的方法有：酶辅助提取法［6］，超声波辅助提取法［7］，微波辅助提取法［8］，有机溶剂提取法［9］。但迄今对桔皮中总黄酮的微波-超声辅助协同提取工艺未见报道。微波-超声协同萃取是近年 发展 起来的一种新方法，具有简单、快速、高效的特点，已被用于天然产物有效成分的提取，尤其在黄酮类、萜类、多糖等有效成分的提取上效果更好。本文研究了采用该技术提取桔皮中总黄酮的最佳工艺条件。 　 　1 器材 　　1.1 材料芦丁对照品( 中国 药品生物制品检定所)；桔皮(广州致信中药饮片有限公司)，购自广东药学院附属门诊部药房：将桔皮粉碎，用折叠成筒状的滤纸装好，加入100 ml石油醚冷浸24 h，然后将其置于80 ℃水浴中，使其微沸回流反复提取，直至提取液澄清为止，取出冷却至室温。抽滤，滤渣用石油醚充分洗涤后，风干至石油醚全部挥发，得到去除色素和油脂的桔皮粉末。 　　实验用水为双蒸水；所用试剂均分析纯。 　　1.2 仪器 Cl 量瓶中，加乙醇70 ml，置于水浴上微热使溶解，冷却至室温，加乙醇至刻度，摇匀。精密吸取10 ml，置于100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得0. 2 mg/ml 芦丁对照品溶液。精密量取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml，分别置25 ml 量瓶中，加乙醇至6 ml，加ρ(NaNO2)=5 %亚硝酸钠溶液1.0 ml，混匀，放置6 min，加ρ［Al(NO3)3］= 10 %硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀，放置6 min，加ρ(NaOH)=5 %氢氧化钠试液10.0 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。以乙醇为参比，用1 cm比色皿，于U3010紫外可见分光光度计上，在400～600 nm 波长处进行扫描。结果表明，对照品溶液在510 nm 处有最大吸收，因此选择510 nm 作为测定波长。在510 nm 波长处测定体系的吸收度，以吸收度(A)为纵坐标、浓度ρ芦丁(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Ａ=0.011 52 ρ芦丁+ 0.006 8 (r=0.999 4)。结果表明，芦丁对照品在所试浓度0.00～56.00 μg/ml范围内呈良好的线性关系。 　　2.2 提取溶剂的选择 　　2.2.1 水提取称取去除色素和油脂的桔皮粉末1.000 0 g于超声-微波协同萃取仪中，加水40 ml，混匀，在超声装置开启、提取温度为80 ℃时，提取60 min。趁热过滤至100 ml容量瓶中，药渣用少量水洗涤3次，每次过滤。并入滤液，冷却，用水定容后备用。 　　2.2.2 乙醇提取称取去除色素和油脂的桔皮粉末1.000 0 ｇ在超声-微波协同萃取仪中，加φ=60 %乙醇40 ml，混匀，在超声装置开启、提取温度为80 ℃时，提取60 min。趁热过滤至100 ml容量瓶中。药渣用少量乙醇洗涤3次，每次过滤。并入滤液，冷却，用乙醇定容后备用。 　　2.2.3 样品溶液总黄酮含量测定移取样品液1.00 ml于25 ml容量瓶中，按标准曲线制备方法进行操作、显色，测定吸光度，由标准曲线得到样品中总黄酮含量。结果见表1。表1 提取溶剂与总黄酮产率的关系（略） 　　由表1可知，以乙醇作溶剂的提取法优于以水为溶剂的提取法。用水做溶剂提取黄酮虽然存在生产成本低，无溶剂残留的优点，但存在提取率较低，提取液存放易腐败变质，后续的过滤、浓缩操作困难且费时等不足，因此本实验选择乙醇作为提取溶剂。 　　2.2.4 超声开与超声关对总黄酮提取率的影响在料液比1∶40，温度为80 ℃，提取时间为60 min的情况下，超声装置开启与超声