结膜印迹细胞学.ppt

结膜印迹细胞学 陈辉 美国DEAN A MCGEE 眼科研究所博士后 四川省人民医院眼科副主任医师 原 理 原 理 由于在各种致病因素（如： vit a缺乏，感染，过敏损伤等）的影响下，眼表细胞（结膜、角膜上皮、杯状细胞）在细胞间连接和细胞的形态、细胞的炎性标志的表达等方面将发生相应改变，这就为对眼表疾病的检测提供了病理学基础，传统的思维是对眼表进行刮片等侵入性方式作病理检查，但其敏感性、特异性均不令人狻Ｗ1977年，Egbert 在眼科使用醋酸纤维膜（Acetate Cellulose）以来，结膜印迹细胞学（Conjunctibai Impression Cytology）得以迅速发展。 原 理 由于醋酸纤维膜为惰性物质，不与组织反应，无毒性，但具有粘附性，使其成为一种对眼表疾病进行非侵入性病检的理想工具，然后将所有取下的标本与传统的染色、免疫荧光、过氧化物酶染色、电泳等技术相结合，使眼科工作者能够对相关疾病作出早期诊断、治疗、预防。 方 法 （一）传统细胞学检查： （一）传统细胞学检查： （一）传统细胞学检查： （二）免疫过氧化物酶染色： （三）免疫荧光染色： CIC的结果判定标准 一、细胞学评价： 一、细胞学评价 1、评价内容: 1、评价内容 (1)视野（1-3个）中杯状细胞存在与否及密度。 (2)上皮细胞核形态改变情况。 (3)上皮细胞核浆(N/C)比值。 (4)胞浆染色后颜色变化情况。 2、Tseng的六级分类标准: 0级：为正常细胞，上皮大小基本一致，胞浆呈蓝绿色，上皮细胞散在中等量杯状细胞，N/C=1:1但需注意杯状细胞密度随取材部位不同而存在生理分布差异。（高-）低：鼻侧睑结膜颞侧穹隆角巩膜缘) Ⅰ级：杯状细胞开始减小，但无角化，杯状细胞密度下降，结膜上皮细胞轻度扩大，胞浆仍呈蓝绿色，N/C=1/2～1/3. Ⅱ级：杯状细胞全部丧失，但无角化，所有结膜上皮细胞均扩大变扁，胞浆蓝绿色或粉红色，N/C=1/4. 2、Tseng的六级分类标准: Ⅲ级：早期轻度角化。所有上皮细胞胞浆均呈粉红色，上皮明显角化，部分胞浆内可见角蛋白，N/C=1/6. Ⅳ级：中度角化，除上述Ⅲ级改变外，许多细胞内见大量堆积的角蛋白及角质透明蛋白颗粒，胞核固缩或崩解成碎片。 Ⅴ级：严重角化，上皮胞浆浓缩，可见大量角蛋白、胞核固缩或崩解成碎片。 三、免疫荧光学评价： 1，正常人：针对Ⅱ类抗原HLA DR和IgE受体CD23的免疫细胞学为阴性，但少数人孤立的树突细胞和抗-HLA DR单克隆抗体强反应，但不和抗CD23单克隆抗体反应，有10%的人的标本对抗-HLA DR抗体和/或抗CD23抗体产生小部分细胞弱反应。 2，慢性结膜炎：在大部分结膜炎中都和单克隆抗体强烈反应。在大部分标本中，两种抗体皆反应，但 HLA DR阳性细胞反应更常见，在应用激素的患者因免疫抑制作用，标本可呈阴性。 三、免疫荧光学评价： 3，泪液缺陷患者： 24 名临床干燥角化异物患者两种抗体(一). 2名Sjogren’s Syndrome患者HLA DR(+)(90-10%的结膜细胞)：IgE受体(一) ，（10%结膜细胞阳性 Stevens-Johnsen Syndrome患者HLA DR(+),IgE受体（+）（95%的结膜细胞阳性）。 8个标本泪液缺陷者对HLA DR,IgE受体示若阳性。 4 ，在HSV,VZV,腺病毒感染者，免疫荧光99.5～100%阳性，具有高度特异性、敏感性。 CIC的临床意义 目前运用CIC对眼表各种疾病的检测结果显示其异常改变如下： 1，VitA缺乏病：CIC分级多在3-4 级，该法敏感特异，而传统的VitA缺乏主要依靠血清测定VitA含量，繁琐、昂贵，难以广泛开展，CIC的优势显而易见。 2，Thiel采用改良的免疫印迹细胞学技术检测HSV,VZV腺病毒眼表感染者，同样具有高度特异性、敏感性。 3，Rivas的研究示：CIC是Sjogern Syndrome的特异敏感检查方法。 CIC的临床意义 4，Adar在研究角膜接触镜配戴者（尤其是主诉不适者），CIC显示：杯状细胞数降低，且在细胞学形态，杯状细胞密度，核蛇样变等方面有显著改变，显然通过CIC对角膜接触镜配戴者以及眼表机械化学、物质损伤的随访，评估有重要意义。 5，Baudouin采用间接免疫荧光法在CIC标本上发现Ⅱ类组织相容性抗原HLA DR核IgE受体CD23两种炎性标志，此法对研究结膜的炎症，过敏提供了有用的方法，对眼表异常的诊治同样有帮助。 CIC的临床意义 6，某些学者也将CIC应用于结膜、角膜移植术后的修复、生长的观察，以及眼科用药对眼表的影响，甚至眼表肿瘤的检查。 * * 方 法 CIC的结果判定标准 CIC的临床意义 ① ② （二）免疫过氧化物酶染