新乡实验室生物治疗CIK操作SOP(修改版).docVIP

生物治疗实验室 适用范围：执行日期：2013 年 10 月 日 启用日期：年 10 月 日 一、血液及回输物运输标准操作程序 1. 目的：规范血液与回输物运输环节。 2. 适用范围：运输与转交环节。 3. 职责： 3.1血液运送环节工作人员均应熟知并遵守本阶段相关SOP。 3.2 本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经技术总监批准签字。 4程序： 4.1 取血人员到病房与采血护士做好交接，认真核对病人信息并做好记录，准确无误后将血放入无菌盘中，签字取回。 4.2 运输人员与取血人员认真做好交接，记录病人信息，与医生治疗申请单一同带回实验室。 4.3 运输人员到达实验室后，将装有血液的无菌盘交与实验员的同时需清楚提供病人信息（姓名、性别、年龄、科室、住院号）并附带医生治疗申请单。 4.4 实验室于回输前1-2天以回输通知单的形式通知患者回输时间，接到通知后运输人员做好记录。取血人员通知医生及患者并确认后续治疗情况。 4.5 回输物送出实验室后，运输人员核对患者信息与数量。 4.6运输人员与取血人员认真做好交接，无误后进行交接签字。、外周血单个核细胞分离标准操作程序 1. 目的：规范外周血单个核细胞分离程序，避免污染。 2. 适用范围：外周血单个核细胞的分离。 3. 职责： 3.1 实验室工作人员均应熟知并遵守本阶段相关SOP。 3.2 本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经技术总监批准签字。 4程序： 4.1 装有血液的无菌盘由物流通道进入万级实验区传递窗中，紫外照射消毒。 4.2 人员由人流通道进入实验室，开启离心机进行预冷，超净台消毒。 4.3 关闭传递窗紫外灯，由无菌盘中取出血液。无菌盘无需进入万级实验区。 4.4准备50mL离心管1-2支，标记号患者姓名。在超净台内将血液从注射器中排出2-3滴至废液瓶中，然后再将剩余血样慢慢注入50 mL离心管中。离心：rpm，10min，4℃。记录患者信息。 4.5准备50mL离心管一只，标记号患者姓名及日期。将上清部分加到50 mL 离心管中，使用5ml注射器吸取血浆4ml用于后期科研。（留取方法见样本留取SOP）剩余血浆56℃ 灭活30min。血浆离心2600rpm， 10min备用。 4.6将生理盐水缓缓注入沉淀中至50 mL，混匀。将血液缓慢匀速注入到淋巴细胞分离液中，避免打破页面。离心：2600rpm， 20min，常温。 4.7准备50mL离心管1-2支，标记好患者姓名。吸取每管中单个核细胞层于50 mL 离心管中，加生理盐水至50 mL。离心：200rpm， 5min，4℃。 4.8弃掉上清，加50mL生理盐水。离心：2600rpm， 5min，4℃ 4.9重复步骤4.8一次。 4.10用细胞培养液重悬细胞，转入到包被瓶中，并加入患者自体血浆2-5ml，培养液总体积约50ml。 4.11将培养瓶置于37℃ 5% CO2培养箱中培养。 4.12 单个核细胞分离后第二日加入20万单位IL-2一。、转袋标准操作程序 1. 目的：规范转袋操作程序，避免污染。 2. 适用范围：CIK细胞扩大培养操作。 3. 职责： 3.1 实验室工作人员均应熟知并遵守本阶段相关SOP。 3.2 本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经技术总监批准签字。 4. 标准操作： 4.1 旋紧培养瓶口后，将培养瓶从培养箱中取出。 4.2 倒置显微镜下观察细胞。当细胞长满整个视野，形态大而圆形时即可进行转袋操作。 4.3 在超净台中旋松培养液瓶口。瓶口，瓶盖过火后，备用。 4.4 用移液管吹下培养瓶中贴壁的细胞。吹吸过程中移液管尽量不要与培养瓶内壁刮碰。 4.5 向培养瓶中加入IL-2 200万IU及患者自体血浆，混合均匀。 4.6 清理超净台，对超净台台面进行消毒，取出培养袋，填写患者信息（姓名、采血日期、转袋日期）。 4.7 旋开培养袋出液口管帽，管帽过火放于高处。 4.8 取50ml注射器一只，按压外包装，确认有无破损。撕开包装，手持注射器中后部将其取出，除去针头和胶塞。注射器两端过火，连接培养袋出液口。操作过程中，注射器两端不得碰到任何东西。 4.9倒入细胞悬液。用培养基冲洗培养瓶二次。补加培养基。 4.10 弃去注射器，管口过火。管帽过火后盖好旋紧。夹子夹住管口。 4.11 用酒精棉球或喷有酒精的无菌纸巾擦拭出液管及培养袋表面，以防液体滴落滋生细菌。 4.12 核对患者信息，无误后双手托起培养袋放入培养箱中。、补液标准操作程序 1. 目的：规范补液操作流程，避免污染。 2. 适用范围：CIK细胞培养过程中补加培养液。 3. 职责： 3.1 实验室工作人员均应熟