清毒片、养正片对白血病细胞uPA活性影响的研究.docVIP

　　清毒片、养正片对白血病细胞uPA活性影响的研究 【摘要】 ［目的］观察中药清毒片、养正片对白血病细胞uPA活性的影响。［方法］SD大鼠24只，随机分为4组：空白组用生理盐水，清毒片组用清毒片，养正片组用养正片灌胃,化疗组用阿糖胞苷腹腔注射，观察含药血清对HL60 uPA活性的影响。［结果］与空白对照组相比较，阿糖胞苷和清毒片、养正片药物血清对HL60细胞培养液上清中uPA的活性都有一定程度的影响，而以阿糖胞苷含药血清降低uPA活性的效果较好。［结论］清毒片、养正片的临床 治疗 作用可能与其降低患者体内白血病细胞uPA活性表达水平的作用有关。 【关键词】 清毒片；养正片；白血病；HL60；uPA 　　Abstract： ［Objective］ethod］248 SD rats ale and half female,divided into 4 groups randomly: blank control（0) group,Qingdupian（Q) group，Yangzhengpian（Y) group and Chemotherapy(H) group.Blank control group ,once a day,4 times in all.Dra,and store the serum at 4℃.Treat the cells for 48 hours,precipitate the cells;the supernatant fluid had inhibitive effect on uPA activity of the supernatant fluid of HL60 cells,and Arac containing serum had the best effect on declining uPA activity.［Conclusion］Suggest the clinical therapeutic effect of Qingdupian and Yangzhengpian be related to its declining effect on uPA activities of leukemia cells. 　　Key ia;HL60;uPA 　 　1 实验材料 　　1.1 实验材料 清洁级SD大鼠24只（购自广州中医药大学实验动物中心），人早幼粒白血病细胞株HL60（购自中山医科大学实验动物中心），清毒片、养正片生药饮片各1剂(购自广州中医药大学第一附属 医院 ),10%胎牛血清（购自杭州四季青公司），完全RPMI1640培养液(sigma 公司产品)，uPA活性检测ELISA试剂盒（Chemicon International,Inc.产品），计数板，盖玻片，96孔板，加样枪，可处理吸头，一次性注射器，试管，Ep管，玻璃毛细管，灌胃针头，血分析用抗凝管、烧杯等。 　　1.2 实验仪器 倒置显微镜（Olympus产品），细胞培养箱（NAPCO Series 5400 CO2 Incubator），-20℃冰箱（HUALING BCD268odel 3550)，干燥皿，解剖台，高压锅，电炉等。 　　2 实验方法 　　2.1 分组与用药 将清毒片、养正片生药饮片用水煎浓缩法处理备用。制备清毒片、养正片药物血清(在广州中医药大学实验动物中心进行)。分组：清洁级SD大鼠24只,体重210±20g，雌雄各半，随机分为4组：空白（O）组，清毒片（Q）组，养正片（Y）组，化疗（H）组。方法参照中药血清药理相关 　 　3 实验结果 　　实验结果显示，与空白对照组相比较，阿糖胞苷、清毒片和养正片药物血清对HL60细胞培养液上清中uPA的活性都有一定程度的影响，而以阿糖胞苷含药血清降低uPA活性的效果最好，清毒片含药血清次之。各组uPA活性对应光密度值变化情况见下表1。 　　表1 清毒片、养正片药物血清对uPA活性的影响（略） 　　与空白组对比，*Plt;0.05，与空白组对比，**Plt;0.01 　 　4 讨论 　　uPA是一种丝氨酸蛋白水解酶，参与纤溶过程。一些研究发现，培养的白血病细胞中有纤溶活化剂（PAs）的高表达。用HL60细胞作为AL细胞的模型研究细胞周围基质降解，证实丝氨酸蛋白酶以尿激酶前体的形式存在，基质金属蛋白酶9（MMP9）前体的活化依赖于纤溶酶原活化剂/纤溶酶系统，并可被抑肽酶抑制，而MMP9只在HL60细胞存在的条件下检测到。结果表明HL60细胞通过纤溶系统活化MMP9，而MMP9的活化促进了基质降解，增强了白血病细胞的侵犯能力［5］。AML患者TFPI、PAP值异常增