传染性法氏囊病病毒VP2基因真核表达载体的构建及初步表达.pdfVIP

动物医学进展 ,2006 ,27 (6) :7274 Pro gre ss in Vet erinary Medicine 传染性法氏囊病病毒 V P2 基因 真核表达载体的构建及初步表达 1 1 1 2 鲁宏伟 ,闫　强 ,陈明勇 ,王 　宾 ( 1. 中国农业大学动物医学院 ,北京 100094 ; 2 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 ,北京 100094) ( ) 中图分类号 :S852 . 659 . 4 ;Q289 文献标识码 :A 文章编号 2006 摘 　要 :根据 GenBank 已登录的传染性法氏 化/ 回收试剂盒 、Trizol 试剂盒购 自北京鼎国生物技 囊病病毒 V P2 基因序列 ,设计 1 对特异引物 , 术公司 ;其它试剂均为分析纯 。 应用反转录聚合酶链反应技术从标准毒株 1. 2 　方法 B87 中 扩 增 了 V P2 基 因 , 将 其 克 隆 到 1. 2 . 1 　引物设计 　根据已发表的 IBDV V P2 基因 p roV A X 载体上 ,构建了 p roV A XV P2 真核 序列 ,设计特异性引物 , 由北京三博远志生物技术有 限责任公司合成 。并在上 、下游引物 5′端分别加上 表达载体 ,在脂质体介导下转染 Hela 细胞 , ( ) EcoR Ⅰ和 X ba Ⅰ酶切位点 划线部分 。序列如下 : 用 R TPCR 方法从转录水平证实 V P2 在 V P2 P 1 : 5′AA GA A T TCA T GA CA AA CC T G Hela 细胞中有特异性表达 。 CA A GA TCA AA CC3′ 关键词 :传染性法 氏囊病病毒 ; V P2 基因; 真 VP2 P2 :5′AA TCTA GA CCACCGGCACA GCTATC 核表达 CTCCTTATGGCCC 3′ ( 传染性法 氏囊病 Inf ectiou s bur sal di sea se , 1. 2 . 2 　病毒总 RN A 的提取 　按 Trizol 试剂盒说 ) ( IBD 是 由传染性法 氏囊病病毒 Infectiou s bur sal 明书进行 。 di sea se viru s ,IBDV) 引起鸡和火鸡的一种急性 、热 μ 1.