质粒提取及酶切图谱鉴定.pdf

维普资讯 黑龙江医药 HeiLongJiangMedicineJournalVO1．18№ ．4 2005 ·253· 质 粒 提 取 及 酶 切 图 谱 鉴 定 李 潇 王明强 王滨友 哈药集团制药总厂 (150086) 摘要 本实验是采取碱变性方法从重组大肠杆菌中提取质粒DNA，并用E0 I，BamH I两种限制性内切酶 对质粒 雠 行适当酶切 ，然后进行琼脂糖凝胶 电泳对DNA酶切 图谱加 以鉴定。通过在紫外灯下观察 电泳结果，证 实利用碱 变性方法提取质枉 ，同时通过酚氟仿抽提，得到的质粒DNA纯度 比较高。并且证实酶切 图谱与预计相符。 从而说明在一般工厂的实验务件下可以进行操作。 关键词 碱变性；质枉；限制性内切酶；琼脂糖凝胶电泳 DistillPlasmidandDeterm inationofREP LIXiao，eta1． HarbinGeneralPharm ．FactoryofHarbinPharmaceuticalGroupCo．，Ltd．(150086) Abstract Thee)中ernem adoptthewayofd￡m turing幻 distillplamaid “DNA”fmm recmJainecoliform ．And it processproperlyd 赡 forpla~niasDNA wiht “F．mR I”， “BamH I”twokindofrestrictionendonucleases．Then ap- praiseacollec6onofiUustrativeplatesni electrophoresisofgelosegd for “DNA”REP．Wecan o[7~1vveasaresultofthe eleetmphoresis、Ⅳim lampofultravioletradiation．Itvalidatehtewa y∞ us~ mturing∞ distillpla~ ．Athtes,alTletime 幻 dj1】pl】 —chlorDf0rn，finally幻 getverypureplas盯nids“DNA”．Itattest幻matchcaseforecastofacollectionof iUustravdveplatesaboutREP．SoitSl htatwecanpeHo~nanexpex~ ton ni mnTmnlymanufacmry． Keywords (1emtu】 pla~nids；restrictionendonucleases；gelosegd electmphoresis 随着现代分子生物学的快速发展，分子生物学实验技术 氯化钠5g 迅速渗透到生命科学的各个领域，特别是医药学。DNA重组 5n~l／L (H调节FH至7．0 技术应用越来越广泛，定向地改造生物或者其功能，改良品 15磅高压下蒸汽灭菌20分钟 种，甚至创造新物种。并且利用微生物生长旺、繁殖快的特 1．3 试剂 点，制备 “工程菌”进行工业化的生产以获取巨大的经济效益 1．3．1 溶 液 I：50nrnol／L葡萄糖 ，25rra~I／LTris·CI 和社会效益。当前，应用到生物医药产业的 重组技术已 (pH8．0)，10nrml／L~YrA(pH8．0)一次可配置约100ml，在 经成为当前世界医药市场上新的增长点。医药行业中出现了 10lbf／ni高压下蒸汽灭菌15min~：存于4℃； 许许多多的生物技术公司。然而，从实验室的基础研究到工