树突状细胞免疫反应[北京肿瘤医院guojun].doc

[摘要] 树突状细胞由于能够刺激并致敏初始T细胞和启动早期免疫反应而被公认为是最具有潜能的抗原提呈细胞。树突状细胞疫苗的抗肿瘤免疫治疗效果在动物模型中得到了验证，同时人树突状细胞培养的方法也得到了进一步的改进和完善。因而，树突状细胞疫苗的抗肿瘤免疫治疗得以进入I-II期临床研究。本文就近年来应用树突状细胞疫苗进行抗肿瘤免疫治疗的临床研究中，树突状细胞的获取和培养、树突状细胞的注射途径和剂量、目前临床应用治疗的肿瘤类型和方法以及治疗的疗效及评价指标进行了综述。 免疫治疗目前在多数肿瘤治疗中，只起辅助治疗的作用，其原因是一方面真正实用的肿瘤抗原十分有限；另一方面是由于多种因素的影响，这些肿瘤相关抗原免疫原性低，难以完成抗原的有效提呈。近年来随着树突状细胞（dendritic cells ,DC）的深入研究，为我们提供了产生更有效的抗肿瘤免疫的理论基础。体内DC数量很少，但却是唯一有能力呈递蛋白质抗原并致敏初始T细胞的APC。研究证实，DC不仅能够以抗原特异的形式启动T细胞是被和杀伤肿瘤细胞（1），而且还可以激发免疫记忆保护，在宿主再次受到肿瘤细胞攻击时发挥保护作用（2）。因此，通过应用DC能够使肿瘤细胞免疫治疗更为有效。 DC的生物学特性 成熟DC形状特殊，其细胞膜有较强的伸缩能力，甚至可扩展到数百微米，扩展的形式有：树突、伪足、面纱等。DC另一特点就是其表面存在大量MHC II类抗原，同时缺乏子系标志（3），如DC14（单核细胞），CD3（T细胞），CD19，CD20，CD24(B细胞)，CD56（NK细胞），CD66b（中性粒细胞）。DC还表达多种黏附分子（4），如：CD11a（LFA21），CD11c，CD50(ICAM22)，CD54(ICAM21)，CD58(LFA23)和CD102（ICAM23），以及共刺激分子如CD80（B721）和CD86（B722）等。DC在成熟和激活的不同阶段，其表型也发生着变化。人体血循环中DC的前体表达CD2，CD4，CD16，CD32和CD33，当其成熟时，这些分子的表达就会逐渐降低。而另一方面，黏附分子、共刺激分子和MHC抗原表达则明显上调。DC的前体骨髓迁移至血液系统，并随血液循环迁移至体内特殊部位，在这些部位内成熟并发挥免疫监视功能。这种向组织内的迁移依靠DC表达趋化因子受体CCR1，CCR5和CCR6等来完成。组织定居的DC，包括皮肤内的郎罕氏细胞以及肝脏、粘膜以及肺中的DC，对抗原进行加工并将其与MHC I类和II类分子形成复合物共同呈递。DC还需要抗原非依赖性信号激活并俘获抗原。这些信号包括LPS，IFN2α，IFN2γ，IL21β和来自病毒及细菌的直接刺激。被激活后，DC下调抗原摄取和加工的能力，上调MHC、共同刺激分子、黏附分子表达和呈递抗原能力。激活的DC将离开组织，通过输入淋巴管迁移至T细胞富集的引流淋巴结内。这个过程主要由DC上调CCR7 受体的表达、并受CCR7的配体MIP3β和SLC 这2种趋化因子而实现。到达二级淋巴器官后激活的DC可分泌趋化因子和细胞因子从而发挥DC独特的机能。另外，实验发现DC还能向NK细胞呈递抗原，为DC启动有效的免疫反应提供另一种方式（5）。 2．DC的获取及培养 近年来，随着对DC的起源、分类标志、摄取及加工处理抗原的机制以及引起DC迁移和成熟的信号传导等领域的认识进一步加深，体外培养获取大量DC用于临床的研究方法日趋成熟。首先，DC可以由CD34+细胞产生，存在于人骨髓、脐血、和成年人外周血中的CD34+细胞，体外在添加GM2CSF和TNF2α的培养条件下可以发育成DC。另外，DC也可以由CD14+ 细胞产生。CD14+单核细胞在添加GM2CSF和IL24的条件下也可以分化为成熟的DC。研究证实了这些途径来源的DC是生物学功能完好的DC，与纯化的体内成熟的DC比较具有同样的APC功能（6），因而，可较好地应用于临床抗肿瘤免疫治疗研究。临床研究大多采用外周血CD14+单核细胞来源的DC，主要因为这种方法取材方便、培养容易。由于临床实验设计标准不同，现在尚难比较上述2种来源DC的疗效。实验发现，在激活混合淋巴细胞反应（MLR）和摄取抗原能力上，鼠骨髓来源的DC比脾脏来源的DC强、成年人外周血DC较脐血DC强（7）。目前临床上应用的DC大都来源于患者外周血，DC经体外培养致敏后，回输患者体内进行抗肿瘤免疫治疗。Kugler_等（8）用正常的同种异体捐献者外周血CD14+单核细胞来源的DC作为疫苗，将经照射的自体肿瘤细胞和同种异体DC（1*108（1乘10的8次方）细胞/例，其中10%--15%为融合体）皮下注射治疗原发性肾癌，获得了较为理想的疗效。这说明同种异体来源的DC在DC疫苗的抗肿瘤治疗中也有着广阔的发展前景。 3．DC的输注途径