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抗出血性大肠杆菌O157H7单克隆抗体的制备及初步应用.pdf
2010 年 4 月 基础眼学句l临床 April2010
第 30 巷第4 期 Basíc Clinical Medicine Vol. 30 No.4
文章编号: 1001-6325 (2010) 04佛0426-02
抗出血性大肠杆菌 0157: 日7 单克隆抗体的制备及初步应用
杨璇1 ，李学民2 ，杨书豪3· ，付庆l
(郑州大学1.基础医学院微微物学与免疫学教研在; 2. 第一附属医院检验科，阿南郑州 45∞52;
3. 郑州兰森生物工程有限公司，问商郑州 450仪)())
中回分类号:R 392. 33 文献标志码:A
1983 年荣同 Riley 等[1] 首次报躏肠出血件大肠杆酶
0157: 阳、数病性大肠杆菌株、霜乱弧两、荆疾杆菌和非定血
0157: 日7 ，我阔于 1987 年首次在出Jfn.性肠炎患者体内分离到
清型大肠杆菌等42 株商株作凝焦试验，观察M灿@与这将细
大肠杆商0157: H7 }i法主要为擦别
目前对该病原体的搭起
菌商株的反应情况。
0
精养、PCR 、磁珠捕获细菌踏养等[2] 。为满足临床快速诊断的 1. 4 免疫胶体企试条的制作[3] :取 4G12 和 5011 配对建t
要求，我们利用细胞融合技术，制备抗 E. ωli 0157: 日7 单克
肢体金免疫屁析技术(GIC的。采用拘橄醺二三铀还原法制备
降抗体(MAbs) ，并以此建立快速检测瓦 coli 0157: 阳的肢体
肢体金，常规方法制备单克降抗体(4G12) 肢体合标iê 济
金免疫后析技术(gold immunochromatographic as咐，GICA) 。 液[4] 。将玻璃纤维浸涮于肢体金标记辩液中，待冗全浸泡
1 材料与方法 均匀盾，取出，冷冻千燥，即成单克隆抗体肢体金标记物。
1. 1 材料:商株由中阔医学细雨保藏管理中心和中罔疾病 分别将 5011 和兔抗鼠 I gG两种抗体包被硝酸纤维素膜
预防控制巾心传染脯预防控制所卫生部医学分子细雨学重 (NC) ，设定测试带和质投带，制备饵被膜。将钮被膜用汉丽
腋回者于 PVC 板上;将棉浆板路接在 NC 膜上端，玻璃纤雄
点实验夜提供; SP2/0 细胞为本所保存;BALB/c 小鼠从中阔
班接 NC 腰下端:肢体余标记物附着在玻璃纤维上，与制被
医学科学院实验动物研究所引进(雌性，8 -10 周龄，体质最
膜衔接。也膜穰施于棉紫板之上;Marker 标志膜疆蘸于玻璃
18 町 22 酶，二级)0 RPM川剧。培养慕放鼠Ig 提及、l巨类鉴~试
纤维之七。
剂愈( Gibco 公叫) ;新生牛血清(杭州回事青生物工程公
1. 5 检测方法及结果的判断:将试纸条 Marker 标志线一端
司) ;添加1fIJHAT、融合剂 PEG(Si伊M 公司)。
1. 2 动物免戒及细胞
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