耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究.docVIP

　　耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究 作者：颜英俊 刘华 杨明清 黄文方 【摘要】 目的 分析我院2005年1～12月临床分离34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药相关基因存在状况，为临床抗感染 治疗 提供依据。方法 应用PCR方法检测13种β内酰胺类抗菌药物耐药相关基因，分别为blaTEM、blaSHV、blaCARB、blaOXA10、blaPER、blaVEB、blaGES、blaDHA、blaIMP、blaVIM、blaGIM、blaSPM、oprD2；3种氨基糖苷类修饰酶基因，分别为：aac(6′)I、aac(6′)II和ant(2)I；整合酶基因I(intI1)。结果 耐药相关基因blaTEM、blaCARB、blaDHA、blaIMP、oprD2、aac(6′)I、aac(6′)II和ant(2)I、intI1阳性率分别为：5.9%、32.4%、14.7%、17.6%、97.1%、21.2%、33.3%、48.5%、3.0%；其余耐药基因均未检测到。结论 携带多种耐药相关基因是耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药的重要原因之一，膜孔蛋白基因oprD2缺失不是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。 【关键词】 铜绿假单胞菌； 亚胺培南； β内酰胺酶类； 氨基糖苷类修饰酶； 整合酶I； 耐药基因 ABSTRACT Objective To investigate 34 strains of the antimicrobial resistance related genes of imipenemresistant Pseudomonas aeruginosa from patients from Jan to Dec 2005. Method Antimicrobialresistance related genes ethod, including blaTEM, blaSHV, blaCARB, blaOXA10, blaPER, blaVEB, blaGES, blaDHA, blaIMP, blaVIM, blaGIM, blaSPM, oprD2, acc(6′)I, aac(6′)II, ant(2)I and intI1. Results The positive rate of antibiotics resistant related genes, named blaTEM, blaCARB, blaDHA, blaIMP, oprD2, acc(6′)I, aac(6′)II, ant(2)I and intI1 ultiple resistant genes related to imipenem ain cause of the Pseudomonas aeruginosa resistant to many antibotics, ain cause of bacteria resistant to imipenem. KEY PRPa)来自于2005年1～12月我院住院患者的临床分离标本(包括痰液、尿液、伤口分泌物、脓液和血液等)。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853和大肠埃希菌ATCC25922。 1.2 菌株鉴定及药敏试验方法 所有菌株均以BD Phoeni×100全自动微生物分析仪鉴定到种，药敏试验采用BD Phoeni×100配套药敏试验复合板，包括阿米卡星、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢噻肟、头孢他啶、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦、头孢吡肟、四环素和复方磺胺甲口恶唑共16种抗生素，头孢哌酮/舒巴坦采用KB法。药敏标准按2005年版CLSI M100S15规定执行。 1.3 主要仪器设备与试剂 Eppendorf centrifuge 5417R低温离心机，恒温金属浴(杭州大和公司)，MJ Peltier Thermal Cycler(美国MJ Research公司)，BioRAD电泳仪，BioRAD凝胶成像系统，琼脂糖(Oxoid公司)，100bp DNA Ladder Marker(大连宝生物公司)，6×上样缓冲液(北京天为时代)。 1.4 模板DNA提取 采用蛋白酶K消化法。 1.5 基因扩增 应用PCR方法共检测17种耐药相关基因，引物序列见Tab.1。氨基糖苷类基因aac(6′)I、aac(6′)II、ant(2)I和整合酶基因intI1热循环参数为：93℃预变性2min→93℃ 30s→55℃ 30s→72℃ 60s，共35个循环，最后72℃延伸2min。β内酰胺类耐药相关基因blaDHA和oprD