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　　脾虚与淋巴免疫相关性实验研究 作者：李宏宇　汪军　高铁峰　樊智青　李丽　李艳 【摘要】 　　目的：对比脾虚造膜小鼠与正常对照组小鼠在淋巴免疫检测指标上的不同，初探补脾以协调旺盛脾、肺、肾三脏，从而进一步探讨中医脾与淋巴免疫二者之间的关联。方法：采用MTT比色方法，以代表小鼠机体免疫功能状态的T淋巴细胞增殖能力、IL2产生能力为检测项目，对正常小鼠及脾虚证小鼠脾脏进行动物模型造模前后及复建过程的免疫指标观察。结果：经四君子汤 治疗 后的脾虚小鼠，免疫指标基本恢复至正常水平。结论：淋巴免疫的三项监视功能与中医脾有着本质的关联。两者所反映的免疫理论实质相互一致。 【关键词】 脾虚小鼠；淋巴免疫；四君子汤 　　四君子汤出自《太平惠民和剂局方》，具有益气健脾，升阳举陷之功，用治脾虚气陷之证。本文拟通过四君子汤对脾虚小鼠特异性免疫功能影响的实验，以探求本方补脾以协调旺盛肺、脾、肾三脏，发挥卫气防御作用的免疫机制，并以此进一步探求后天之本脾与淋巴免疫之间的相关性。 　　1 实验材料 　　1.1 试剂与药品 刀豆蛋白A(ConA,Sigma公司)、IMDM培养基(GiBco公司)、标准胎牛血清( 中国 医学 科学 院灏洋生物)、淋巴细胞分离液(比重1.088，上海恒信化学试剂有限公司)、噻唑蓝(MTT，AMRESCO公司)、二甲基亚砚(DMSO,天津津东天正精细化学试剂厂)、2%台盼蓝、淋巴细胞计数液。 　　四君子汤(200%浓度，每毫升含生药2g)、大承气汤(100%浓度，每毫升含生药1g)、加味大承气汤(100%浓度，每毫或含生药1g)，由长春中医药大学第一附属 医院 制剂室煎制。 　　1.2 仪器 二氧化碳培养箱(德国贺利氏公司)、MBⅢ型酶标检测仪(北京新技术研究所生产)、冷冻离心机(IE.USA)、洁净工作台(苏州净化设备厂)、倒置显微镜、普通光学显微镜。 　　1.3 实验动物 昆明种雄性小鼠，体重18-20g；C57BL/6J雄性小鼠，体重18-19g，购自长春高新医学动物实验研究中心。 　　2 实验方法 　　2.1 动物分组及模型制备 小鼠随机分为3组：正常对照组(10只)、脾虚造模组(14只)、药物试验组(16只)。造模组和给药组小鼠采用耗气破气法制备小鼠脾虚模型［1］。11d造模结束次日，给药组小鼠每日灌服2g/ml浓度的四君子汤，按11g/kg体重的药量进行脾虚证的 治疗 ，共计7d。正常对照组小鼠每日灌服等体积的生理盐水。 　　2.2 脾脏T、B淋巴细胞增殖试验 采用MTT比色法。四君子汤组小鼠停药后次日、正常对照组、脾虚造模组小鼠，摘除眼球放血处死。无菌摘取小鼠脾脏，按常规方法制备脾细胞悬液，其细胞活力＞95%，最后用完全IMDM营养液调整小鼠脾细胞浓度至5×106/ml。分别加入各组的脾细胞工作悬液于96孔培养板中，100μl/孔。每只小鼠设置3复孔。LPS诱导的B淋巴细胞增殖实验，加入LPS100μl/孔，终浓度为10μg/ml；ConA诱导的T淋巴细胞增殖实验，加入ConA100μl/孔，终浓度为5μg/ml。置37℃，5%CO2培养箱孵育48h后，每孔加入5mg/mlMTT 10μl/孔，继续放入CO2培养箱中孵育6h。取出后，贴壁吸出上清液100μl弃掉，加入DMSO100μl/孔，以溶解甲肷物质。充分振荡后，静止20min，在酶标仪上570nm波长处测定吸光度值。以各样本的平均吸光度值代表T、B淋巴细胞的增殖程度。 　　2.3 统计方法 数据为计量资料以(±s)表示，组间比较用t检验。 　　3 实验结果 　　四君子汤对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖能力的影响 见表1。 　　表1 不同组别小鼠脾T、B淋巴细胞增殖能力比较（略） 　　注：给药组与造模组比较△△△P＜0.01，给药组与正常对照组比较△△P＜0.05，造模组与正常对照组比较***P＜0.001。 　　4 小结 　　统计数据表明，四君子汤给药组与正常对照组小鼠比较P＜0.05，两组间有差异，但差异不显著。表明给药组小鼠已基本上恢复至正常小鼠水平；与脾虚造模组小鼠比较则结果相反，P＜0.001，两组间出现显著性差异，T、B淋巴细胞的增殖率明显低于服药7d后的给药组小鼠。表明四君子汤提升T、B淋巴细胞增殖的能力较明显。 　　小鼠脾虚则T、B淋巴细胞的增殖率低，四君子汤治疗后，增殖能力得到提升，表明脾虚证与淋巴细胞免疫相互关联。 现代 免疫系统的防御作用，即特异性免疫功能，则是机体抵抗各种致病微生物侵袭的能力。可以看作是中医所谓正气防御外邪的作用，主要是卫气的作用。卫气作用的发挥，是肺、脾、肾三脏的功能协调旺盛的结果。即卫气化生于肾中之阳气，充养于中焦脾胃，散布于肺气的宣发。而三脏协调旺盛的关键又在于