膜片钳技术在中药对心肌钙离子通道作用研究中的应用.docVIP

　　膜片钳技术在中药对心肌钙离子通道作用研究中的应用 【摘要】 　　膜片钳技术自发明以来，被广泛用于生物学、生 理学 、药理学等多种学科的基础 研究 和 应用 研究中，为解决生物学跨膜信号传导 问题 提供了革命性的检测手段。 目前 该技术已运用于中药对离子通道作用的研究中，尤其是心肌钙离子通道。本文综述了近年来中药对心肌钙通道的作用。 【关键词】 膜片钳技术；中药；钙离子通道 　　 The Application of Patch Clamp in the Research of Traditional Chinese Medicine on Cardiac Muscle Calcium Channels Abstract：Patch clamp technique has been acology since it ethod for biological signal transduction.Recently the technique has been used in the research of the impact of traditional Chinese medicine on ion channels,especially for cardiac muscle calcium channels.The paper made a brief revieedicine on calcium channels. Key p;traditional Chinese medicine;calcium channels 膜片钳技术是以微弱电流信号测量为基础,利用玻璃微电极与细胞膜封接来测量多种通道电流,其测量值可达到皮安级(pA,10-12A),是一种典型的低噪声的测量技术。膜片钳技术的问世给细胞生物学的研究带来了一场革命。当前该技术已经成为细胞电生理学的重要研究 方法 。尤其是该技术近年来渗透到中医药研究的各个领域,对中医药研究水平的提高起到了很大的推动作用。 1 膜片钳技术的基本原理 膜片钳的基本原理是利用负反馈 电子 线路，将微电极尖端所吸附的一个至几个平方微米的细胞膜的电位固定在一定水平上，对通过通道的微小离子电流作动态或静态观察，从而研究其功能。膜片钳技术实现膜电流固定的关键步骤是在玻璃微电极尖端边缘与细胞膜之间形成高阻密封，其阻抗数值可达10～100GΩ。由于此阻值如此之高，故基本上可看成绝缘，其上之电流可看成零。此密封不仅电学上近乎绝缘，在机械上也是较牢固的。此时可通过膜片钳放大器，选用不同的记录模式（细胞吸附式cell-attached，全细胞模式ol/ml)对心肌L、B、T型3种类型钙通道的活动均无影响［1］。但是人参皂甙Rg1、人参二醇组皂甙Rc,Rd（1 500 μg/ml）、人参三醇组皂甙单体Rh（160 μmol/L）可使心肌钙通道的平均开放时间缩短,平均关闭时间延长,开放概率减小，但对3种类型钙通道的电流幅值无明显影响,其作用与异搏定相似,与Bay K 8644相反［2～4］。通过与钙通道阻滞剂异搏定（37.5 μg/ml）、钙通道激动剂BAY K 8644(5 nmol/L)的对照实验,证明人参二醇组皂甙Rc（200 μg/ml）对钙通道有阻滞作用而Rd（200 μg/ml）则无此作用［5］。 3.2 粉防己碱 粉防己碱是从防己科多年生木质藤本植物粉防己中提取的。运用膜片钳单通道技术研究发现0.3～300 μmol/L粉防己碱浓度依赖性地阻滞 L型钙电流,半数抑制浓度IC50为13.3 μmol/L，但对其电流-电压曲线无明显影响［6］。全细胞记录研究［7］却发现1 μmol/L粉防已碱可使电流-电压曲线的各电流值均降低，0.1～3.2 μmol/L使钙电流呈浓度依赖性降低,IC50为0.7 μmol/L。此外,0.3 μmol/L就能阻滞异丙肾上腺素0.1 μmol/L引起的钙电流增大。虽然两者在实验具体结果上有差异，但仍证明粉防己碱可阻滞心肌细胞L型钙电流。 3.3 丹参 丹参为活血化瘀的代表药之一，除含脂溶性非醌类成分，丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ-A等外，还有水溶性成分。全细胞记录实验表明,丹参酮Ⅱ-A10、20和40 μmol/L可使L型钙电流的峰值分别减少35.2%、57.7%和74.7%,但对最大激活钙电流的电压依赖曲线及稳定激活曲线无影响［8，9］。同样使用全细胞记录，经过20 min的缺氧以及5 min的复氧后,50、100、200 mg/L丹参分别将兔心室肌细胞L型钙通道电流的峰值从(667.9±158.7)pA减小至(537.1±121.3)pA、(497.2±47.9)pA、(343.8±73.1)pA［10，11］。显然,丹参酮Ⅱ-