牛副流感病毒3型NP单抗的制备及初步应用.pdfVIP

第 33 卷第口期 中国预防兽医学报 Vo l. 33 ,No.12 2011 年 12 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Dec. 2011 doi: 10.3969/j.issn.l008-0589.201 1.12.14 牛副流感病毒 3 型 NP 单抗的制备及初步应用 吕闯，朱远茂，董秀梅，蔡红，于作，高欲燃，薛飞. (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001) 捕 要:为制备牛副流感病毒3 型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb) ，本研究利用原核表达并纯化的 重组NP (rNP)免疫 BALB/c 小鼠，取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP2/0 融合。采用以 BPIV3 为检测抗原的间 接ELISA 方法筛选阳性细胞克隆，经 3 次克隆纯化后获得 1 株稳定分泌抗 NP 特异性 MAb 的杂交瘤细胞株(5E5) 6 并制备腹水，采用 rNP 及 BPIV3 包被的 ELISA 效价分别是 2 X 10 和 1. 28 X 105 ELISA、 western blot、lFA 。间接 试验表明该 MAb 具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定该 MAb 亚类为 IgGlI K 。特异性试验表明该 MAb 不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒反应。免疫组化试验表明该 MAb 可以检测 BPIV3 感染动物体内 的病尿。该 MAb 还可用于建立检测 BPIV3 病原及抗体的诊断方法，同时为研究 NP 的结构和功能提供了条件。 关键词:牛副流感病毒3 型;核衣壳蛋白;羊克隆抗体;特异性 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2011) 12-0970-04 Preparation and preliminary application of monoclonal antibody against nucleocapsid protein of bovine parainfluenza virus type 3 LV Chuang , ZHU Yuan-mao , DONG Xiu-mei , CAI Hong , YU Zuo , GAO Yu-ran , XUE Fei* (Division of Livestock Infectiolls Diseases , State Key Laboratory of Veterinary Biotechno1ogy , Harbin Veterinary Research Institute , Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001 , China) Abstract: To prepare monoclonal antibody (MAb) against nucleocapsid protein (NP) of bovine parainfluenza virus type 3 (BPIV匀， BALB/c mice were immunized with purified recombinant NP (rNP) expressed by E. coli and a hybridoma secret