牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

动物医学进展，2013 ， 34(5):11-16 Progress in Veterinary Medicine 牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心 ELISA 检测方法的建立及初步应用 杨俊兴l ， 2 ，曹琛福l ，曾少灵1 ，卢体康1 ，孙 洁l ， 2 ， 张彩虹1 ， 2 ，唐金明1·2 ，陶 虹1.2 ，吕建强1 ，花群义1.2 爱 (1.深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，广东深圳 518045; 2. 深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室，广东深圳 518045) 摘 要:为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 抗原快速检测 ELISA 方法，用于 BVDV 抗原的快速检 测。用纯化的 BVDV 作为抗原，经动物免疫、细胞融合、间接 ELISA 筛选和亚克隆，得到了 3 株抗 BVDV 的单克隆抗体(2A6 、 2F4 和 5C9) 。选用羊克隆抗体 2A6 和 5C9 包被 ELISA 板，用 HRP 标记的羊克隆抗体 2F4 作为夹心抗体，建立了检测 BVDV 的双羊克隆抗体夹心 ELISA 方法。通过对 BVDV 阳性样品、其他病 毒阳性样品和阴性对照样品及系列稀释的阳性样品检测，表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。 用 ELISA 检测 326 份临床样品，结果表明该方法与 RT-PCR 和商品化 ELISA 试剂盒检测结果符合率分别 为 98.8% 和 99.0% 。该方法可以用于 BVDV 抗原快速检测和对大量样本的筛选。 关键词:牛病毒性腹泻病毒;酶联免疫吸附试验;单克隆抗体 中图分类号:S852.659.6 文献标识码:A 文章编号: 1007-5038( 2013) 05-00 11-06 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea vi- 的单克隆抗体(2日)作为第二抗体，建立了 BVDV rus , BVDV)是黄病毒科瘟病毒属的代表种，主要引 双单克隆抗体夹心 ELISA 检测方法，一方面提高了 起牛病毒性腹泻，临床上以发热、腹泻、季占膜靡烂、教 ELISA 方法的特异性，另一方面，简化了 ELISA 反 膜病，持续性感染与免疫耐受，免疫抑制，母畜流产， 应程序，提高了检测效率。通过与商品化 ELISA 试 死胎和畸胎等[口。 BVDV 为单股正链 RNA 病毒， 剂盒和 RT-PCR 方法比较，该 ELISA 方法具有良好 全长约 12. 3 kb~ 12. 5 kb. BVDV 只有一个血清型， 的特异性和敏感性。 根据 BVDV 基因组的差异.BVDV 分为 BVDV 1 型 1 材料与方法 和 BVDV 2 型[2-3J 0 BVDV 还可感染猪、羊、鹿等其 1. 1 材料 他偶蹄动物。本病呈世界性分布，在我国 20 多个省 1.1. 1 病毒和细胞株 BVDV 1 型( Oregon) 、 均有该病的报道，严重危害牛、羊、猪、鹿等养殖业的 BVDV 2 型、猪瘟病毒(Classical swime fever virus , 发展阳。目前，BVDV 的检测方法有免疫学方法和 CSFV) 、赤羽病病毒 (Akabane disease virus , 分子生物学方法，其中 ELISA 方法是常用的免疫学