犬瘟热病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

新疆农业科学 2011 ,48( 6) :1ω8 -1103 Xinjiang Agricultural Sciencω 犬瘟热病毒巢式 RT- PCR 检测方法的 建立及初步应用 杨井泉1 气韩猛立2 ，朱艳平3 ，黄新2 ，薄新文2 (1.石河子大学动物科抗学院..吁疆石河子 83笃汩3;2.吁疆农垦科学院/常碰兵团绵羊繁育 生物被水重点实跄盒，新撞石河子 832000;3.. ，学院生命科学与统本系，河南新， 4S筑朋) 摘 要:【目的]建立一种犬瘟热病毒(CDV)RT- 阳ted 陀R 检测方法。【方法】根据 CDV 弱毒株臼tder晦阳川 的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计套式引物，进行特异性、敏感性、重复性实验。【结果]特异性试验表明，该方 法可以特异扩增出 CDV NP 基因片段，但从 RNA 病毒狂犬病病毒(RV) 、 DNA 病毒犬细小病毒(CPV) 以及正常 3 Vero 细胞中均未扩增出该条带。敏感性试验表明，RT- 盹R 可以扩增 10- RNA，而建立的 RT­ 稀释度的病毒 nested 民R 可以扩增 10-嘀释度的病毒 RNA，后者的敏感性明显高于前者。重复性实验表明，不同情况下的 3 次重复实验，结果相同。用 RT-ne创ed PCR 对石河子地区疑似感巢 CDV 的病料进行检测，结果表明，该研究 建立的 RT- nested 陀R 不仅能有效的检测 CDV 感染，而且能够检测不同组织的样品。【结论1 建立的 RT­ 瞄ted 陀R 检测方法，适用于动物 CDV 的快速诊断和流行病学调查。 关键词:犬瘟热病毒z 反转录巢式民R;RT- PCR;NP 基因 中图分类号:5852.65φ5;5851. 34 文献标识码:A 文章编号:1∞1- 4330(2011)06 - 1098 - 06 Development and Application of RT - nested PCR for Detecting Canine Distemper Virus 1 2 2 2 2 YANG Ji吨- quan • , HAN M吨_li ， ZHU Yan - pinlf ，即ANG Xin , BO Xin - wen (1. College 01 Animal Science Technology , Shihezi Universitr , Shihezi Xinjiang 832α泪， China; 2. Xi咖暗Academr ~扎伊cultural and Reclamation Scie附/向协脯ry 01 Sh句Breedi暗Biology Technology 01 Xinjia暗Production and Construction Corps , Shihezi Xinjiang 832创泪， China; 3. Department 01 L拚 sc阳lCe and Technology , Xinxiang College , Xinx归ng Henan 453∞3 ， China) Abstract: [ Obj配创刊] The chief purpose of this study wωto， 臼tab