猴腺病毒Ⅰ型间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

第 29 卷第4 期 Vo l. 29 No.4 实验动物科学 2012 年 8 月 LABORATORY ANIMAL SCIENCE August 2012 伊 研 。 … 茹 伊 告 。 bv4VAF 猴腺病毒 I 型间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用* 张荣建 贺争鸣 (中国食品药品检定研究院，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京 100050) 摘要:目的 建立检测血清中猴腺病毒 I 型(SAdV-I) 抗体的间接免疫荧光方法(IFA) ，为检测实验猴群中 SAdV-I 的感染情况提供参考依据。方法 用 SAdV-1 病毒感染 BSC-I 细胞，待 50% 细胞出现病变时，用膜蛋白酶消化以 20μL 1 x 10 个ImL 浓度的细胞液滴到 24 孔镀膜玻片上，丙酬固定。利用制备的抗原片通过浓度滴定确定猴血清、 羊抗猴二抗最佳工作条件。对 IFA 进行特异性、敏感性、重复性验证并初步检测猴血清样本。结果 建立了 SAdV- 1 抗体的间接免疫荧光检测方法。在采集的 21 份猴血清样本中，检出 SAdV-I 抗体阳性 9 例， 12 例血清检测为阴 性。结论 方法具有良好的特异性和稳定性，可作为 SAdV-l 检测的可靠方法。 关键词:猴腺病毒 I 型;间接免疫荧光 中图分类号: R392 文献标识码:A 文章编号: 1006 - 6179 (2012) 04.{)001.{)4 最近，Roy 和 Esona 等人研究发现，猴腺病毒在 究院实验动物资源研究所保存。 猴群中高度流行[1] ，并存在变种传染给人的风险。 1. 2 试荆 检测血清中抗体可以作为有效的诊断方法之一。免 0.01 mo l/L pH7. 2 的 PBS; FITC 标记的 IgG 抗 体: KPL 公司产品，实验中用 1% 伊文思兰稀释;1% 疫荧光技术在病毒研究领域应用最为广泛，并且取 伊文思兰，用 PBS 做 1: 10 000 稀释;猴血清标本:采 得重要成果，主要用于病毒抗原在器官细胞内的定 位，病毒感染过程的研究，也可用来检查血清中的抗 自国内几个实验用恒河猴生产厂家;猴 SAdV-1 IgG 病毒抗体[2J 。间接免疫荧光法测定血清中抗体特 抗体阳性血清、阴性血清，为 2010 年采集的标本，并 已用 ELlSA 方法鉴定。 异性和稳定性较好。根据荧光强度可以对猴血清抗 1. 3 SAdV-l 的细胞培养 体水平进行半定量分析。 将 BSC-1 细胞传代培养，在传代 24 h 之内形成 本实验通过浓度梯度滴寇，分别确定了一抗猴 509毛 -70% 单层时接种 SAdV-1 毒种 1 mL ，置 37(: 血清和二抗 FITC 标记的羊抗猴 IgG 抗体的最佳工 作浓度，经特异性、敏感性、重复性测定后建立了