牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立.pdfVIP

新疆农业科学 2010 ,47(4) :761 -764 Xinjiang Agricultural Sciences 牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2 重组蛋白 ELISA 检测方法的初步建立 钟发刚，黄新，王新华，李娜 (fr碰生产建设兵团绵羊繁育生物拔术重点实...室，新碰石河子 83立即} 摘 要:[目的]为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法。【方法]重组质位 p町- (1 - 345)转化宿主菌 B121(DE) ，以IPfG 进行诱导表达，使外源基因获得了较高水平的表达; Weslem - blol 检测表 达产物反应原俭，同时进行特异性检测:将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kil 蛋白质纯化试剂 盒纯化回收目的蛋白，再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验，确定目的蛋白作为包被抗原 的最佳稀释度。[结果}重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的 19.7% ，且具有较好的反应原性和特异性，以此方 法建立的间接 EUSA 方法对收集的约 43 头份血清样品进行检测，检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合 率达到 93.55 3岛。【结论]以 BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接 EUSA 检测方法是可行的，为其进一步的 标准化奠定基础。 关键词:牛病毒性腹泻病毒;E2 重组蛋白;EUSA 文献标识码:A 中图分类号:5851. 653 文章编号:1∞1 - 4330(2010)04-σ761- 04 Establishment of Bovine Viral Diarrhea Virus Recombinant Protein ELISA Assay ZHONG Fa-gang , HUANG Xin ,WANG Xin-hua , U Na (Key μbo剧。η 0/ Breed Bwtechnology 0/ Sheep , Xi句iia暗 Production Const11tctwn C.叩 ， Shihhotze Xinjiang 832∞0 ， China) Abstract: [Objective and Method] The recombinant expressi吨 plasmid PET - (1 - 345 ) ,which include the foreign gene fmgment coding the main antigenic of bovine viral diarrhea virus (BVDV) ,was tmnsformed into host cell B121 (DE3) and induced wÏth IPTG.. West - Blot ass町 reactivity 皿d specificity of the target protein .咀len ， the target protein , after being purified with the his band kit , was used as 皿 antigen in the squar哩 titration test and optimal dilution rate for the ELISA w凶 ωnfirmed . [Result]The recombinant protein expression can reach 19.7% in ωtal amount of somatic protein. West - Blot assay showed the g∞d immunological reactivity and specificity of 由e t吨et protein ,43 bovine sera sarnples were delecled with Ihe