牦牛源多杀性巴氏杆菌LAMP检测技术的初步建立.pdfVIP

安徽农业科学，Journal of Anhui Agri. Sci. 2013 ,41 (34) : 13126 -13127 ,13129 责任编辑陈娟责任校对况玲玲 辑牛源多杀性巴氏杆菌 LAMP 检测技术的初步建立 繁萍1 ，张瑞强1* ，杨月娟l ，艾军2 ，周晓黎2 ，钟兴芝l (1.青海大学农牧学院，青海西宁 81佣16;2. 云南出入境检验检疫局，云南昆明 650228 ) 摘要 参考已发表的多杀性已氏杆菌 KMT-l 基因保守区设计 LAMP 引物，以花牛多杀性巴氏杆菌 PMqh-l0 株为对象，建立了用于检测 耗牛多杀性巴氏杆菌的环介导等温扩增方法。结果显示，63 c水浴锅中反应 50 min 即可观察到阳性结果，dN1P的最适浓度是1. 8 mmoνL， Mg2+ 录运浓度是 12 mmo.νLo 方法特异性检测结果显示，该方法对随机选用的其他萄元扩增作用。 关键词 耗牛;多杀性巳氏杆菌;环介导等温扩增;KMT-l 中图分类号 5823.8 丁 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611 (2013)34 一 13126 -02 The Development of the L佣p Media能d Isothenna1 Amplification for Detection of Yak Pasteurella multocida FAN pi吨 et a1 (Agriculture and Animal Husbandry College , Qinghai University , Xini吨， Qinghai 81∞16 ) Abstract Referred to published P.ωteurella multocÚÚl s conservative KMT-J gene , primers were designed for the loop mediated isothermal amplification (LAMP) to detect yak Pasteurella multocÚÚl PMqh-lO.ηle result indicated that within fifty minutes under the isothermal condi- 2 tions of 63 、二， positive resuhs can be observed , optimal concentration of dNTP is 1. 8 mmoVL , and optimal concentration of Mg + is 12 mmoV L. The method cant amplify other random selected bacteria. Key words Yak; Pωteurella mulωCÚÚl; LAMP; KMT-l 多杀性巴氏杆菌是引起挺牛出血性败血症(Haemoπhag­ 在温箱中 37 c过夜培养，离心收集细菌，提取 DNA( 按照 ic cepticaemia of cattle ,HSC )的主要病原，病畜常见高热、肺 DNA 提取试剂盒说明书操作) ，分装后，置于-20 c冰箱中 炎间或呈现急性胃肠炎及内脏器官出血等特征性病变，多呈 保存备用。 散发或地方性流行，若不及时治疗死亡率极高[I] ，引起程牛 其他试验菌经液体LB 培养基过夜培养，离心收集细菌， 出血性败血症的病原主要为 B 型。以往青海地区的诊断技 提取 DNA ，分装后-20 c保存备用。 术主要依赖临床症状结合实验室细菌培养鉴定等作出判断，