犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶真核表达质粒的构建及初步免疫试验.pdfVIP

Vo l. 35 ,No .4 中国预防兽医学报 第 35 卷第4 期 Chinese Joumal of Preventive Veterinary Medicine Apr. 2013 2013 年 4 月 doí: 10.3969/j .íssn.1008-0589.2013.04.17 犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶真核表达质粒的构建 及初步免疫试验 罗洪林 I\ 王豪举 l ，港剑波 1 ，周雪梅 1 ，周容琼 2 ，周作勇 2 (1.西南大学动物科技学院预防兽医学重庆市重点建设实验室，重庆北暗 400716; 2. 西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌 402460) 摘 要:为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)真核表达质粒的免疫原性，本实验利用 RT-PCR 方法 扩增 TPx基因，将其克隆于真核表达载体 pVAXl 中构建重纽质粒pVAX1- TPx ，并对其进行体外表达鉴定及通 过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测，评价其在体内诱导的免疫反应。实验结果表明，将pVAXI-TPx转 染于 Cos7 细胞中能够正确表达TPx ，其分子量约为 28 ku ，并被阳性血清所识别。将pVAXI-TPx 免疫 BALB/c 小 鼠并采用 ELISA 检测结采显示，重组质粒免疫组的外周血中抗体、 η12 细胞分泌的 IL4及 ILl3 细胞因子水平均 显著高于空质拉及空白对照纽。0.05); 但η11 分泌的 IFN-γ 及 IL2 水平差异不显著。此外，淋巴细胞增殖试验 结果也表明， pVAXI-TPx 免疫纽显著高于其他两个对照纽怡0.05) 。实验数据表明 pVAXI-TPx 免疫可以有效诱 导特异性的体液和细胞免疫。 关键词:犬恶丝虫; TPx; 表达质粒;免疫~、性 中图分类号: S852.7 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2013)归国0325-05 Construction and primary immune responses of a DNA vaccine encoding thioredoxin peroxidase gene of Dirofilaria immitis in mice 1 1 1 LUO Hong-lin , WANG Hao-ju , CHEN Jian-bo , ZHOU Xue-meF , ZHOU Rong吨iong2， ZHOU Zuo-yong2 (1. Key Construction Laboratory of Preventive Veterin缸y Medicine , Southwest University , Beibei 400716 , China; 2. Department of Animal Science , Rongchang Campus , Southwest University , Rongchang 402460 , China) Abstract: To evaluate the irnmunogenicity of a DNA vaccine encoding thioredoxin peroxidase (TPx) of DÏIofìlaria immitis, the TPX gene was amplified by RT乎CR and cloned into expression vector of pVAXl to