牛卵形巴贝斯虫PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

Vo l. 34.No.8 第 34 卷第8 期 中国预防兽医学报 2012 年 8 月 Chinese Joumal of preventive Veterinary Medicine Aug. 2012 doi: 10.3969/j .issn.1008-0589.2012.08.14 牛卵形巴贝斯虫 PCR 检测方法的建立及初步应用 黄国明，贾立军，薛书江，李 阁，焦石，张守发· (延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133002) 摘 要:为建立牛卵形巴贝斯虫(B. ovata)快速检测方法，本研究根据 Gen8ank 中登录的B. ovata CCTl}基因 序列设计引物，建立了 PCR 检测方法。对该方法的最佳反应条件进行优化，并进行特异性、敏感性及临床样本 检测试验。结果表明，建立的 PCR 方法扩增 B. ovata CCTl}基因片段大小为 1008 坤，与参考株序列同源性为 1 ∞%。该方法对牛巳贝斯虫、牛双芽巳贝斯*、牛瑟氏泰勒虫基因组 DNA 扩增结果均为阴性。最低可以检测 样品中 34 个拷贝的 DNA。通过对49 份11各床样本的检测，该方法比姬姆萨染色镜栓阳性率高 8.2 %。本实验为 B. ovaω 的诊断提供了一种特异、敏感的检测技术。 关键词:牛卵形巳贝斯*; PCR; 检测 中圈分类号: S852.72 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2012)08-0651-04 Establishment of PCR assay for detection of Babesia ovata HUANG Guo-mi晤， JIA Li才un， XUE Shu-jíang, LI Chuang , JIAO Shi , ZHANG Shou-fa. (Department of Veterin町Medicine. Agricu1tura1 College of Yanbian UniVet!i邸. Yanji 133∞2 ， China) Abstract: To establish a rapid diagnosis method for Babesia ova臼.也e PCR assay w邸 developed with the specific prim目3 were designed according ω 也e sequence of也e CCTl} gene available in the GenBank. Under the optimized reaction conditîons，由e PCR assay was highly specificωamplify a 1,008 bp fragment from B. ovate genomic DNA with a detection limit of 34 copies, but no amplification 明白白e DNA of B. bo巾， B. bigemina and Theileria sergenti. Fw世lermore， a total of 49 blood DNA 姐mples were tested by 也e PCR method and the results ∞nfirmed that 也e PCR method wωsensitive and specific for det饥ting B. ovata infection in cattle. Key words: Babesia ovata; PCR; detectioD 并定名为B. ovata[飞在我国，自启等于 1986 年在河 牛的卵形巴贝斯虫病(Babesiosis) 是由巴贝斯科 巴贝斯属的牛卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)寄生于红 南省卢氏县牛体中发现并分离出单一种，并证明与