牛支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆三重PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011 ,42(2):306-310 Acta Veterinαria et Zootechnica Sinicα 牛支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状 亚种小克隆三重 PCR 检测方法的建立及 初步应用 李大伟1 ，黄灿平1 ，张彦明l ，谢建华2 ，冉智光Z ，熊仲良2\ 范伟兴h (1.中国动物卫生与流行病学中心，青岛 266032 ;2. 霞庆市动物疫病预防控制中心，建庆 401147) 摘 要:本研究旨在建立一种可一次性l泛分牛文原体、丝状文原体线状.iIf种小克降和无乳交原体的二三重 PCR 诊断 方法，为1临床诊断和流行病学调查提供可靠检测技术。根据 GenBank 发表的上述 3 种病原的基因组序列保守区域 设计 3 对特异性寻|物建立三重 PCR 方法;确定其检测敏感性，以猪支原体、鸡支原体、无乳支原体和丝状支原体丝 状亚种小克隆基因作模板检验其特异性;同时和病原分离鉴定结果对比其准确性。结果表明在优化体系和条件下 能够同时得到扩增长度为 448 、 549 、 375 bp 3 条特异性片段，米扩增出猪、鸡支原体模板特异件片段;其敏感性(可 1 检测到的最小模板 DNA 食最)为 0.8 ngμL- ;36 份临床样品检测结果援示，主建 PC民检测结果与分离培养鉴定 方法→致，均能鉴定出牛支原体阳性病料。本研究建立的五熏 PCR 诊断方法能够一次性鉴别 3 种支原体，具有高 敏感性、特异性和准确性，可用于临床诊断和流行病学调查。 关键诩:牛支原体z 丝状支原体丝状.iIf种小克隆;:X;乳支原体，三重 PCR 中团分类号:S852.62 Jt献标识码 :A 文掌编号: 0366-6964( 2011 )02-0306-05 Establishment and Application of the Triplex PCR for Detecting M. Bovis , M. m ycoides subsp. m ycoides Small Colony Type and M. agalactiae 1 z 1 LI Da咐ei ， HUANG Can-pi时， ZHANG Yan-ming , XIE Jian-hua , RAN Zhi-输 guani , XIONG Zhong-liani 篝， FAN We七xini* (1.αina Animal Health and Epídemiology Center , Qingdao 266032 China; 2. Chongqíng Centerfor Anímal Dísease û Jntrol and Prevention ， αongqing 401147 , Chína) Abstract: The study was aimed at establishing a triplex PCR to differentiate M. bovis. M. my- coides subsp. mycoides Small Colony Type and M. agalactiae out of the same sample , for clinical diagnosís and epidemíological su