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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 【目的】用来分离单一菌落或用来估计样本中微生物的数目。 * * * * * * * * * * * 取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL, 加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。 重复此步骤直至所需要的稀释浓度。 从最后稀释菌液中吸取 0.1mL菌液,置入准备好的无菌琼脂内。 将三角玻璃棒浸于酒精中 将三角玻璃棒在火焰上燃烧 (须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中,引起燃烧) 使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来,将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目,再依照稀释倍数推算出菌液浓度。 4. 生产性能的测定 一般采用两步法: 初筛:以量为主 复筛:以质为主 二、诱变育种 用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变。 诱变剂:能够提高生物体突变频率的物质。 诱变剂 物理:紫外线,快中子 化学:硫酸二乙酯,亚硝基胍 { 诱变育种的主要环节 (1)以合适的诱变剂处理细胞悬浮液 ——诱变 (2)用合适的方法淘汰负效应变异株, 选出性能优良的正变异株——筛选 第三节 生产菌种的改良 一、原生质体融合(protoplast fusion) 1.标记菌株的筛选 2.原生质体的制备 3.原生质体的融合与再生 聚乙二醇(PEG)-脱水剂 助融剂 Ca2+-提高融合频率 4.融合子的选择 二、DNA重组技术 (DNA recombination technology) 目标DNA片断的获得 与载体DNA分子的连接 重组DNA分子引入宿主细胞 从中选出所需重组DNA分子的宿主细胞 第四节 菌种的衰退、复壮与保藏 一、菌种的衰退 衰退的原因: 1.菌种保藏不当 2.菌种生长条件没有得到满足 二、 菌种的复壮 1. 纯种分离 2. 通过寄主体进行复壮 3. 淘汰已衰退的个体 三、菌种保藏 1.原理 低温、干燥、缺氧、缺营养物质 2. 方法 (1)斜面保藏法 (2)干燥保藏法 (3)悬液保藏法 (4)冷冻干燥保藏法 (5)低温保藏法 第五节 种子的扩大培养 一、微生物的培养方法 1.表面培养 2.固体培养 3.液体深层培养 二、菌种的扩大培养 菌种扩大培养的目的: 为每次发酵罐的投料提供相当数量的代谢旺盛的种子。 (一)种子制备的工艺流程 摇瓶 保藏菌种 试管斜面活化 茄瓶斜面 种子罐 固体培养基 摇瓶 种子培养 发酵培养 (二) 斜面菌种的培养 1.不宜多次移种。 2.活化斜面中加0.1%葡萄糖。 培养基特点:原料较精细。 (三)一级种子培养(摇瓶) 培养基特点: 使用的原料基本接近于发酵培养基。 (四)二级种子培养(种子罐) 培养基的特点: 和一级种子相似,其中葡萄糖用水解糖代替,更接近于发酵培养基。 大量地接入培养成熟菌种的优点: 1.可以缩短生长过程的延缓期,因而缩短了发酵 周期,提高了设备利用率。 2.节约了发酵培养的动力消耗。 3.并有利于减少染菌机会。 谢谢大家! * * * * 第一章 菌种选育 第一节 工业常用微生物及要求 一、常见微生物 (一)细菌(bacteria) 醋杆菌属(Acetobacter) 乳杆菌属(Lactobacillus) 芽孢杆菌属(Bacillus) 短杆菌属(Brevibacterium) 棒杆菌属(Corynebacterium) (二)放线菌(actinomyces) 最大的经济价值在于产生多种抗生素(antibiotic) 链霉菌(Streptomyces) 小单孢菌属(Micromonospora) (三)霉菌(mould) 1.曲霉属(Aspergillus) 黑曲霉(A. niger) 米曲霉(A. oryzae) 黄曲霉(A. flavus) 2.青霉属(Penicillum) 桔青霉(P. citrinum) 产生5’-磷酸二酯酶,降解核糖核酸为四个单核苷酸。 3. 根霉属(
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