蛋白质电泳.PDFVIP

蛋白质电泳 目的：分离蛋白质混合物 • 蛋白质等电点 张四洋 • 蛋白质分子量 中国医科大学实验技术中心三部 实验技术中心 实验技术中心 • 一维电泳（One dimensional gel 一维电泳： electrophoresis,1DE ），垂直板十二烷基硫酸 • 根据蛋白质分子量：垂直板十二烷基硫酸 钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） 钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl • 二维电泳（two-dimensional gel,2DE ），又称 sulfate-polyacrylamide gel 双向电泳，包括第一向等电聚焦电泳 （isoelectric focusing,IEF ）和第二向SDS- electrophoresis，SDS） PAGE 实验技术中心 实验技术中心 • SDS：是一种阴离子去垢剂，它能够与蛋白质多 肽链中的氨基酸残基按大约1:2 比例结合。破坏 • SDS：十二烷基硫酸钠 蛋白质分子之间的氢键和疏水作用，破坏蛋白质 分子的二级和三级结构，变成只含有一级结构的 • Polyacrylamide ：聚丙烯酰胺 肽，并保持蛋白的溶解性。 • 蛋白质在电场中的泳动距离只与分子量有关。 实验技术中心 实验技术中心 • 每一个蛋白质分子都因为结合了许多的SDS而带有 大量的负电荷，使蛋白质丧失了原有的电荷状态， 形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从 而消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，因 此在进行电泳时，SDS-蛋白复合物在PAGE 中的迁 移速率只取决于蛋白的分子量大小。 实验技术中心 实验技术中心 聚丙烯酰胺凝胶： • 单体丙烯酰胺：(acrylamide，简称Acr) • 交联剂：N,N- 甲叉双丙烯酰胺(N，N-methylene-bisacylamide， 简称Bis) • 催化剂：过硫酸铵(ammonium persulfate，简称APS) • 促凝剂：N ，N，N′，N′-四甲基乙二胺(N，N，N′，N′- tetramethyl