2017年临床检验技师考试生化检验第14章重要考点.doc

2017年临床检验技师考试生化检验第十四章重要考点 本章考点 1.临床化学常用分析方法 光谱分析、电泳技术、离心技术、层析技术、电化学分析技术的基本原理和应用 2.临床化学方法的建立 (1)方法建立的根据 (2)方法建立的过程 (3)方法的评价 (4)方法建立后的临床观察 第一节　临床化学常用分析方法 一、光谱分析(分光光度技术) 定义： 利用物质具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。 它具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。 分类： (一)可见及紫外分光光度法 分光光度法的理论基础是朗伯-比尔定律。 1.Lamber-Beer定律： A = k·b·c A为吸光度 k——吸光系数 b——光径，单位：cm。 c——溶液浓度，单位：g/L 在可见-紫外分光光度法中，通常在测定未知样品浓度的同时，与同一个已知浓度的标准物作比较，可以利用以下公式计算而求出其浓度,即比较法。 其中Cx和Ax为标本管浓度和吸光度，Cs和As分别为标准管浓度和吸光度。 2.摩尔吸光系数：在公式“A=k·b·c”中，当c=1 mol/L，b=1cm时，则常数k可用ε表示称摩尔吸光系数。 ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。 ε是物质的特征性常数。 不同物质的摩尔吸光系数不同 3.比吸光系数：在公式“A=k·b·c”中，当c为百分浓度(w/v)，b为cm时，则常数k可用E%表示，称为比吸光系数或百分吸光系数。 (二)原子吸收分光光度法 根据待测元素的气态原子能吸收相同原子所发射的特定波长的光，其吸收特性遵循Lambert-Beer定律，即在一定条件下，原子的吸光度同原子蒸气中待测元素基态原子的浓度成正比。 常用的定量方法有： 1.标准曲线法： 将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程分别进行测定，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度，即可从标准曲线上找出对应的浓度。由于影响因素较多，每次实验都要重新制作标准曲线。 2.标准加入法： 把待测样本分成体积相同的若干份，分别加入不同量的标准品，然后测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准品加入量为横坐标，绘制标准曲线，用直线外推法使工作曲线延长交横轴，找出组分的对应浓度。 本法的优点是能够更好地消除样品基质效应的影响。 3.内标法： 在系列标准品和未知样品中加入一定量样本中不存在的元素(内标元素)，分别进行测定。以标准品与内标元素的比值为纵坐标，标准品浓度为横坐标绘制标准曲线，再根据未知样品与内标元素的比值依曲线计算出未知样品的浓度。 本法要求内标元素应与待测元素有相近的物理和化学性质。只适用于双通道型原子吸收分光光度计。 (三)荧光分析法 有些物质物质受到有较高能量的光(如紫外光)照射时，在吸收了某些波长的光后，会发射出不同波长和不同强度的光(光致发光)，照射停止，发光亦随之消失，这种光称为荧光。 利用荧光强度进行分析的方法，称为荧光法。 在荧光分析中，待测物质分子成为激发态时所吸收的光称为激发光，处于激发态的分子回到基态时所产生的荧光称为发射光。 荧光分析法测定的是受光激发后所发射的荧光强弱。 在一定条件下，荧光物质的浓度愈大，发射的荧光强度也愈强。 (四)火焰光度法(火焰发射光谱法) 是待测元素利用火焰作为激发源，成为激发态原子回降至基态时发射的光谱强度进行含量分析的方法，属于原子发射光谱分析的一种。 样品中待测元素激发态原子的发射光强度I与该元素浓度C呈正比关系，即I=aC，式中a为常数，与样品组成、蒸发和激发过程有关。 火焰光度法通常采用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和内标法。 临床工作中，火焰光度法主要用于体液中的钠、钾测定，钠的特征谱线为589nm(黄色)，钾的特征谱线为767nm(深红色)。 (五)透射和散射光谱分析法 主要测定光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度，常用法为比浊法，又可称为透射比浊法和散射比浊法。 临床上多用于对抗原或抗体的定量分析。 二、电泳分析 在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。 常用的电泳分析方法： 1.醋酸纤维素薄膜电泳： 醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯，由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。 这种薄膜对蛋白质吸附小，能消除电泳中出现的“托尾”现象。 具有分离速度快、样品用量小的特点。适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 2.凝胶电泳： 以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸。 琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。 3.等电聚焦