银杏叶微波提取物清除DPPH自由基的工艺研究.docVIP

　　银杏叶微波提取物清除DPPH自由基的工艺研究 【摘要】 　　目的研究银杏叶中抗氧化活性物质的最佳提取工艺。方法应用微波辅助提取法提取银杏叶抗氧化活性物质，以清除DPPH自由基的IC50值为活性跟踪指标，采用正交实验对浸提条件进行了优化。结果最佳提取工艺为：微波辐射时间20 min，乙醇体积分数70%，固液比1∶20(g：ml)，提取温度50℃。 结论按此优化条件进行提取，平均IC50值为1.29 μg/ml，银杏总黄酮得率可达到3.1%。 【关键词】 正交实验 微波提取 银杏叶 抗氧化活性物质 　　Abstract：ObjectiveTo study the optimum extraction process of antioxidative substances from Ginkgo biloba leaves. MethodsMicro Ginkgo biloba leaves. The extraction conditions of antioxidative substances from Ginkgo biloba leaves bic analysis and IC50 of scavenging DPPH free radical onitoring parameter.ResultsThe optimum extraction conditions in, extraction time, 70% ethanol at 50℃, and a material/solvent ratio of 1:20(g:ml).Conclusion Under this condition, IC50 of scavenging DPPH free radical of antioxidative substances from Ginkgo biloba leaves is 1.29 μg/ml ethod; Microa公司产品；芦丁标准品；其它药品试剂均为分析纯；水为实验室自制新鲜蒸馏水。银杏叶（采购于长沙市药材市场）买回后叶片与叶柄分开，叶片在烘箱中50℃烘至手捏碎，粉碎，过40～80目筛备用。 　　 2 方法 　　2.1 标准曲线的绘制精确称取无水芦丁对照品20 mg于50 ml容量瓶中，用30%乙醇定容，再移取25ml芦丁溶液至另一个50 ml容量瓶中，用30%乙醇定容。分别移取上述溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml于25 ml容量瓶中，补加30％乙醇至12.5 ml，加入1 ml 5% NaNO2， 6 min后加1 ml 10%Al(NO3)3，6 min后加10 ml 4%NaOH，用30%乙醇定容，摇匀，15 min后于508 nm处以试剂空白为参比，测定吸光度。以浓度-吸光度进行回归，绘制标准曲线，求得回归方程：A=11.095C+0.009 1，C为芦丁含量（mg/ml），A为吸光度，相关系数 r=0.999 8，表明在该浓度范围内线性关系良好。 　　2.2 银杏叶微波提取物总黄酮含量的测定称取2.0g干燥银杏叶于圆底烧瓶中，加入相应浓度的溶剂，在一定微波辐射条件下提取一定时间，得到滤液，离心分离，移取1 ml上层清液于25 ml容量瓶中，按“1.2.1”项中标准曲线绘制的测定方法，在508 nm处测定其吸光度A，并从芦丁浓度和吸光度的关系式中，得出芦丁浓度C ( mg/ml )，经过换算求出银杏叶中的总黄酮得率。 　　2.3 银杏叶抗氧化活性物质的微波辅助提取银杏叶抗氧化活性物质浸提工艺单因素实验。 　　溶剂体积分数的选择：40～80目干燥银杏叶中分别加入其质量25倍的50%，60%，70%，80%体积分数的乙醇溶液后于50℃提取20 min。 　　微波辅助提取温度的选择：40～80目干燥银杏叶中加入其质量25倍的60%乙醇溶液后分别于40，50，60，70和80℃提取20 min。 　　微波提取时间的选择：40～80目干燥银杏叶中加入其质量25倍的60%乙醇溶液,然后在50℃下分别提取10，15，20，25和30 min。 　　固液比的选择：40～80目干燥银杏叶中分别加入其质量15，20，25和30倍的60%乙醇溶液，于50℃提取20 min。 　　银杏叶抗氧化活性物质浸提工艺正交实验：在单因素实验基础上，采用L9(34)正交实验对微波提取温度、微波提取时间、料液比和乙醇体积分数进行试验，考察其对银杏叶活性物质的抗氧化性能的影响，对其提取条件进行优化。然后，按此优化条件进行银杏叶抗氧化活性物质的提取。 　　2.4 银杏叶抗氧化活性物质浸提液的抗氧化活性的测定DPPH贮备液的配制：准确称取DPPH试剂0.257 7 g，用无水乙醇(分析纯)溶解，并定