同济大学普通化学思考题答案实验二十二 绿色植物的色素提取、分离.pdfVIP

实验二十二 绿色植物的色素提取、分离 1、绿色植物叶片的主要成分是什么？提取液中可能含有哪些化合物？ 答：主要成分：蛋白质、纤维素、脂肪、糖类、水、无机盐等。 提取液中主要含有叶绿素a、叶绿素b 叶黄素和胡萝卜素等易溶于乙醇和石 油醚的脂溶性物质，如脂肪，蛋白质。 1、采用丙酮可以直接提取叶绿体色素，它与采用乙醇—石油醚混合溶剂提 取对实验结果各有什么影响？ 我认为主要有方面： （1）从实验的分离原理考虑，丙酮不如乙醇及石油醚混合液的提取效果好。 分离原理是利用叶绿体中的四种色素在层析液中的扩散速度不同，如果采用 丙酮作为提取液的话各种色素分子在其中溶解度差别不大，扩散速度也不存在明 显差异那么就没有办法达到分离各种色素的目的。 而乙醇和石油醚混合液中的石油醚是一种脂溶性很强的有机溶剂，并且四种 色素在其中的溶解度不同：溶解度最高的是胡萝卜素，它随石油醚在滤纸上扩散 得最快；叶黄素和叶绿素a 的溶解度次之；叶绿素b 的溶解度最低，扩散得最慢。 这样，四种色素就能很快地在扩散过程中分离开来。 （2 ）从溶剂本身性质考虑，丙酮有毒性且挥发性大,气味不佳,刺激性强,但是， 对色素的溶解度大;而乙醇石油醚的毒性虽小,但溶解效果不是特别好，提取效率 不如丙酮高。 3、为什么用无水NaSO4 水干燥提取液？水的存在对实验结果有何影响？ 用饱和NaCl 溶液及蒸馏水萃取提取液之后可以除去大部分水溶性杂质，分 液所得的油层（即，石油醚层）中还有少量的水分残余，用无水硫酸钠（又称为 无水芒硝，元明粉，主要用于有机溶剂的干燥除水，具有强烈的吸水性，因而除 水效果好、并且残留少。）进行干燥，可将水充分除去，有利于下一步的浓缩及 最大限度地提取所有色素。 植物色素(Phytochromes)主要有脂溶性色素与水溶性色素两类。若提取液中 有水，其结果是脂溶性色素被提取而水的存在使水溶性色素流失，使得实验的提 取率降低。 4 、Rf 值的计算公式是什么？其影响因素有哪些？ Rf 的定义为：样品中某成分在纸层析或薄层层析特定溶剂系统中移动的距离 与流动相前沿的距离之比。一般来说是指：薄层色谱法中原点到斑点中心的距离 与原点到溶剂前沿的距离的比值。 其主要影响因素：和被测物质极性、展开剂极性有关，也和固相吸附剂的吸 附能力、展开剂的洗脱能力有关。 具体：（一）薄层的厚度 （二）展开方式：第四章第三节中已叙述了薄层色谱的展开方式，其中主要有不 饱和展开、饱和展开及夹层式展开三种，Rf 值随展开方式不同而异。总的情况 是饱和展开的Rf 值较不饱和为低，这是由于在饱和展开槽内，溶剂从薄层板上 挥发很少，减少了溶剂在薄层板上流动的溶量，加快了展开速度。另一方面不饱 和展开槽内，薄层板上溶剂大量挥发，溶剂耗用量增大，因而Rf 值较高。在饱 和展开槽内薄层板在槽内进行溶剂蒸气平衡过程中，吸附剂吸附了一定量的溶剂， 而同时逐去了少量水份，使薄层板活度有所增加，也造至Rf 值的下降。不饱和 展开槽往往形成“边沿效应”，影响 Rf 值，这一点已在前一章述及。但是捷伍 （Zeeuw ）提出，不饱和展开槽分离效能较饱和槽的分离效能好，并且认为在严 格控制展开条件下，也可以获得良好的Rf 值重现性。他用巴比土的同系物进行 了一系列实验，证实不饱和展开槽的上述优点。 （三）相对湿度：展开槽内的相对湿度，对Rf 值的影响，也有一些文献报道， 因此，在薄层色谱操作中，特别要注意大气相对湿度的影响，若在湿度较高的环 境中操作，则点样应特别迅速，尽量不要使薄层板在空气中暴露时间过久，以免 空气中的水份改变薄层板的活度，引起Rf 值的变动。 （四）温度：在薄层色谱操作中温度对Rf 值的影响，一般情况下是不严重的 (五) 展开溶剂：展开溶剂的组成应该是固定的，因此在配制时其比例应非常准 确，否则将影响Rf 值的重现性。展开溶剂的纯度要特别注意，如丙酮中水份的 含量对Rf 值有一定的影响，因为水份含量改变将影响展开溶剂的极性。一般溶 剂采用分析纯试剂即可，必要时可精制后使用。 (六) 薄层板的活度：活度对Rf 值有影响是肯定的，因此要严格控制活化的温度 与时间。活化后的薄层板，不宜在空气中暴露，亦不宜在干燥器内放置过久。 除以上所述影响Rf 值的因素外，其他如吸附剂的粘度，粘合剂的种类，点样量 等均对薄层色谱的Rf