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同源重组法构建多功能农药降解基因工程菌研究_蒋建东.pdf
21 6 Vol. 21 No. 6
2005 11 Chinese Journal of Biotechnology November 2005
Construction of Multifunctional Genetically Engineered
Pesticides-degrading Bacteria by Homologous
Recombination
*
蒋建东, 顾立锋, 孙纪全, 代先祝, 文 阳, 李顺鹏
*
JIANG Jian-Dong, GU L-i Feng, SUN J-i Quan, DAI Xian-Z u, WEN Yang and LI S un-Peng
, , 210095
College of Lfi e Sciences, Key Laboratoryf or Microbiological Engineering of Agricultural Environment fo Ministry of Agriculture, Nanj ing Agricultural University,
Nanj ing 210095, China
构建遗传稳定的多功能农药降解基因工程菌可以为农药污染的生物修复提供良 的菌种资源, 然而, 构建遗传稳定
且不带入外源抗性的基因工程菌是一个难点通过以受体菌的16S rDNA 为同源重组指导序列sacB 基因为双交换正筛选标
记构建同源重组载体, 二亲结合的方法将甲基对硫磷水解酶基因( mp ) 整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp. CDS- 1 染色体的
16S rDNA 位点, 分别成功构建了含 1 个和2 个mp 基因插入到rDNA 位点且不带入外源抗性的基因工程菌株CDS-mpd 和CDS-
2mpd同源重组单交换的效率为317@ 10- 7~ 618@ 10- 7 通过 PCR 和Sout ern 杂交的方法验证了同源重组事件基因工程
菌遗传稳定, 能同时降解甲基对硫磷和呋喃丹甲基对硫磷水解酶( MPH) 的比活在各生长时期均高于原始出发菌株, 比活最
高达6122 muPLg
同源重组, rDNA, sacB , 基因工程菌, 农药降解, 生物修复
Q933 A 1000-3061( 2005) 06-0884-08
Abstract Construction of multifunctional pesticides-degrading genetically engineered microorganisms ( GEMs) is increasing
important in t e bioremediation of various pesticides contaminants in environment. However, construction of genetically stable
GEMs wit out any exogenous antibiotic resistance is t oug t to be one of t e bottlenecks in GEMs construction. In t is article,
omologous recombination vectors wit t e recipientcs
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