食品微生物检验精要.pptVIP

二、检测基本程序 样品的采集 样品种类样品种类可分为大样、中样、小样三种。大样系指一整批，中样是从样品各部分取得的混合样品，小样系指做分析用，称为检样。检样一般以25g为准，中样以200g为准。 采样用具： 如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子和开罐器等，必须是灭菌的。 采样方式： 根据样品种类如袋、瓶和罐装者，应取完整的未开封的。如果样品很大，则需用无菌采样器取样；样品是固体粉末，应边取边混合；样品是液体的，通过振摇即可混匀；检样是冷冻食品，应保持在冷冻状态(可放在冰内、冰箱的冰盒内或低温冰箱内保存)，非冷冻食品需保持在0～5℃中保存。 采样标签：采样前或后应立即贴上标签，每件样品必须标记清楚(如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样年、月、日)。 送检 样品送到食品卫生微生物检验室应越快越好，一般应不超过3h。如果路途遥远，可将不需冷冻样品保持在1～5℃环境中(如冰壶)。如需保持冷冻状态，则需保存在泡沫塑料隔热箱内(箱内有干冰可维持在0℃以下)。 送检时，必须认真填写申请单，以供检验人员参考。 检验 食品卫生微生物检验室接到送检申请单，应立即登记，填写实验序号，并按检验要求，立即将样品放在冰箱或冰盒中，积极准备条件进行检验。 各食品卫生微生物检验室必须备有专用冰箱存放样品。一般阳性样品，发出报告后3d(特殊情况可适当延长)始能处理样品。进口食品的阳性样品，需保存6个月，方能处理。阴性样品可及时处理。 报告 检验完后，检验人员应及时填写报告单，签名后，送主管人员核实签字，加盖单位印章，以示生效，立即交食品卫生监督人员处理。 三、检测过程中的技术及注意 分离前的准备 A：培养基制备 培养基（形态分）： 液体培养基； 固体培养基； 半固体培养基； B：无菌取样 样品预处理（如均质) C 样品的稀释:使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法. 2 分离方法 2.1 用固体培养基分离纯培养方法： 稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线分离法 稀释摇管法（用于厌氧菌的培养 稀释倒平板法:操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！ 涂布平板法:使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！ 使用移液管时注意问题？ 涂布示意图： 稀释倒平板法:操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！ Steps in loop dilution 平板划线法： 原理示意图 划线操作： 图Ⅴ-4，A： 用接种环以无菌操作挑取 土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条， 再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线， 再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线 和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。 划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养。  图Ⅴ-4，B 将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温室培养。  恒温培养 结果观察 菌落总数的测定－－平板菌落计数法 程序 菌落计数 选择2～3个适当稀释度悬液各1ml，加入无菌空培养皿内，每个稀释度做2～3个培养皿 用生理盐水进行无菌稀释，做成几个适当稀释倍数的悬液 每个培养皿中倾注约1.5ml熔化并冷却到45℃ 左右的营养琼脂或肉汤琼脂培养基，冷却后，于37℃培养24h 被检样品 报告结果 ↓ ↓ 操作要点 将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基置于45 ℃恒温水浴锅中保温备用。 编号:无菌试管（10-1 、10-2 、10-3 、10-4。。。。。）、无菌培养皿、空白对照平板 稀释菌液： 摇匀平板：平板前后、左右或者以顺时针、逆时针。 倒置培养 菌落计数统计 例 次 不同稀释度的平均菌落数 菌落总平均数及报告方式（个/ml，或个/g） 10-1 10-2 10-3 两个稀释度菌落数之比 1 1468 174 20 － 17400或1.7× 104 2 多不可计 295 46 460/295＝1.6 37750或3.8 × 104 3 多不可计 271 60 600/271＝2.2 27100或2.7 × 104 4 多不可计 1550 511 － 511000或5.1 × 105 5 28 10 7 － 280或2.8 × 102 6 0 0 0 － 1 × 10或 10 7 多不可计 303 18 － 30300或或3.0 × 104 ?? ①应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告；②如有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，视两稀释液测定值之比来决定，如其比值小于2，应报告其平均数；如大于2，则报告其中较小的数字；③如所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀