HSP70入核与PARP-1结合在肝缺血再灌注损伤中的保护作用.pdfVIP

HSP70 入核与PARP-1 结合在肝缺血再灌注 损伤中的保护作用 研究生：张晓宁 导 师：张劭副教授 中文摘要 目的: 通过建立大鼠热休克及肝脏缺血再灌注模型，研究 HSP70 进入细胞核与 PARP-1 结合，在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用。 方法: 选择健康的雄性Sprague Dawley (SD)大鼠，体重在180g-250g之间，随机分 为5组：HSP70抑制组（H-/P+组），通过槲皮素抑制HSP70的高表达；阴性对照组 （NC组）；热休克组（H+/P+组），通过热休克促进HSP70的高表达；阳性对照组（PC 组）即肝脏缺血再灌注组，Pringle法建立肝脏缺血再灌注模型；PARP-1抑制组 （H+/P-组），通过3-AB抑制PARP-1的表达。各组造模成功后取肝脏组织及血液样 本，分析各组大鼠血生化指标改变，Western blot分析HSP70与PARP-1的表达情 况，免疫共沉淀分析HSP70与PARP-1的结合情况，肝脏标本HE染色观察组织形态 学改变。结果采用专业图像分析软件进行分析，用SPSS18.0软件进行统计分析。 结果: 1.用自动生化仪检测血清学标本，统计软件分析结果示各个组相互比较均有 显著性差异，P0.01，有统计学意义。PC 组血清 ALT 值最高，与其余各组比较 有显著性差异，P0.01；H+/P+组与H-/P+组、H+/P-组比较有显著性差异，P0.01， 血清ALT 值较低；H-/P+组与H+/P-组比较血清ALT 值高，有显著性差异，P0.01； 表明细胞核中HSP70 与PARP-1 均可发挥肝功能保护作用，HSP70 对肝功能的保 护作用强于PARP-1。 2.通过提取细胞核中HSP70 行Westren blot 检测，证实HSP70 进入细胞核 中，且明确了各处理组中HSP70 的表达情况。统计分析示：H+/P+组与 H+/P-组 3 万方数据 比较无显著性差异，P0.05；H-/P+组与PC 组比较无显著性差异，P0.05；H+/P+ 组、H+/P-组与其他组比较，Hsp70 的表达增高，有显著性差异，P0.01；NC 组 与其余组比较均有显著性差异，P0.01，只有少量Hsp70 的表达；表明热应激、 缺血再灌注损伤均可促进HSP70 表达，槲皮素起到了抑制HSP70 的表达。 3.提取细胞核中PARP-1 行Westren blot 检测，统计分析各组PARP-1 表达 情况：H+/P+与其余组比较有显著性差异，P0.01，表达明显增多；H-/P+组与 PC 组、NC 组及H+/P-比较有显著性差异，P0.01，PARP-1 表达增多；H+/P-组与 PC 组、NC 组比较PARP-1 表达量多，有显著性差异，P0.01；PC 组与NC 组比较 有显著性差异，P0.01；表明热休克及缺血再灌注损伤均促使细胞核PARP-1 的 表达，3-AB 达到了抑制PARP-1 的过表达。 4.免疫共沉淀检测：提取各组大鼠肝脏细胞核蛋白，分别用PARP-1、HSP70 抗体免疫沉淀，再行Western blot 分析，结果示：在70kDa 和29kDa 处各出现 一条带，为HSP70 和PARP-1 蛋白，证实了细胞核中HSP70 与PARP-1 复合物的存 在。表明了在热休克及缺血再灌注损伤等应激时，HSP70 进入细胞核中与PARP-1 结合。 5.HE 染色结果显示：NC 组（空白对照组）肝小叶结构基本正常，肝小叶中