原癌基因Wip1在乳腺癌中的表达及临床意义.pdfVIP

(1) The high expression of Wipl mRNA and its protein in breast Cancer tissue may promote tlle growth of breast cancer. (2) Wip1 may become a new target for therapy of breast cancer. Key words: Wip1; breast cancer; Immunohistochemistry; RT-PCR 5 前 言 乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，其发病率有明显上升趋势，但 发生机理尚不甚清楚。目前，乳腺癌的治疗仍采取以手术为主的综合治疗。近年 来随着分子生物学的飞速发展，基因研究已成为生命科学研究的重点，理所当然 也成为乳腺癌研究的热点。目前，基因治疗在乳腺癌治疗中显示出良好的应用价 [1] [2] 值但也存在诸如用于临床治疗的新基因太少 ，并没找到乳腺癌发病的环节 等 若干问题。 1997 年，通过基因筛选法Fiscella[3]及其同事首先发现了Wip1 ，其为一种原 癌基因且与野生型p53 存在密切的关系。Wip1 为PP2C 家族成员之一，其致癌 的机制还没完全阐明清楚，研究结果显示：某些原癌基因的激活和抑癌基因的缺 失或失活及大量细胞周期调节基因功能的改变在人类肿瘤的发生发展过程中起 [4,5] 了重要作用 。目前已经发现Wip1 作用于包括p53 、p38MAPK 、ATM 、chk1、 chk2、MDM2 和UNG2 在内的至少7 种靶蛋白，通过直接或间接的使7 种靶蛋 白去磷酸化从而促进p53 降解，降低其转录活性而发挥其致癌作用。 目前，Wip1 基因在国内研究的较少，国外已有研究证实在卵巢透明细胞癌、 [6-10] 神经母细胞瘤、胰腺癌、胃癌、髓母细胞瘤中Wip1 呈高表达 。在乳腺癌中 [11] 的高表达率为11％ 。Wip1 高表达在肿瘤发生发展中起重要作用，且与患者的 预后可能存在相关性，即Wip1 高表达的患者可能预后较差。 基于以上背景，本课题采用 RT-PCR 检测乳腺癌组织和癌旁乳腺组织中 Wip1mRNA 表达，同时采用免疫组织化学方法检测Wip1 蛋白表达情况，旨在探 讨他们在乳腺癌表达中表达的意义及其与临床病理特征之间的关系，为乳腺癌的 预防及治疗靶点提供理论支持，这是该课题的研究重点。 6 材料和方法 一、标本 本实验所有乳腺组织标本均于20 10 年5 月至2011 年6 月取自蚌埠医学院第 一附属医院肿瘤外科，标本取自手术切除的乳腺癌瘤体、癌旁 5cm 处，在大标 本离体30 分钟内取出经液氮速冻后置入经去酶处理的冻存管中，放入－84 ℃冰 箱中备用。其中经病理检查确诊为乳腺浸润性导管癌75 例，其对应的癌旁组织 75 例作为阴性对照。所有病例均为女性，有完整的临床和病理资料，术前均未 接受放疗和化疗。病理科收集此 75 例乳腺癌存档蜡块癌组织和相应癌旁组织行 免疫组化，这75 例行免疫组化病例中，患者年龄为30～74 岁，中位年龄为55.3 岁。根据国际抗癌联盟的TNM 分期Ⅰ期26 例，Ⅱ期34 例，Ⅲ期 15 例。选取 75 例冻存新鲜组织中的30 例行RT-PCR 。 二、实验试剂与仪器 （一）实验试剂 1、免疫组化试剂： （1）兔抗人Wip1多克隆抗体：艾碧康生物有限公司。 （2）EliVisionTM plus KIT-9903 （A 、B ）检测试剂盒：迈新生物技术开发公司。 A 即用型酶标抗鼠或兔聚合物增强剂/ 即用型酶标抗羊聚合物增强剂 B 即用型酶标抗鼠或兔聚合物/ 即用型酶标抗羊聚合物 （3）液体DAB （二氨基联本胺）酶底