高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响的论文.docVIP

　　高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响的论文 高能x射线对肺腺癌a549细胞ercc1表达的影响 【关键词】 肺肿瘤；a549细胞；切除修复交叉互补基因1；x线疗法 【摘要】 　　目的 检测高能x射线对肺腺癌a549细胞与顺铂耐药相关的基因——切除修复交叉互补基因1（ercc1）表达的影响。方法 对a549细胞进行x射线照射，总剂量10 gy／(5 d·5f)。利用rtpcr检测照射前及照射开始后第1～4周细胞的ercc1基因的表达；免疫组织化学sabc法检测照射前后细胞ercc1蛋白的表达。结果 照射后第1～3周a549细胞ercc1 mrna及蛋白的表达水平比照射前显著升高，差异有显著性(f=152.00、26.63,q=6.03～28.31,plt;0.01)。结论 肺腺癌a549细胞照射后可能出现顺铂耐药。 【关键词】 肺肿瘤；a549细胞；切除修复交叉互补基因1；x线疗法 　　effect of highenergy xray on ercc1 expression in lung adenocarcinoma a549 cells 　　ei, et al 　　 　　(department of oncology, the affiliated hospital of qingdao university medical college, qingdao 266003, china); 　　［abstract］ objective to study the highenergy xray on expression of ercc1 gene associated an lung adenocarcinoma a549 cell. methods the a459 cells munohistochemistry (sabc method). results on the first to third rna and protein ay shoor; a549 cell; excision repair crossplementation group 1; xray therapy 　　肺癌是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌（nsclc）约占80％，而约2/3的nsclc病人在发现时已失去手术机会， 故放化疗综合治疗已成为该类肿瘤常用的治疗手段。.再次或多次化疗可以诱导多药耐药导致肿瘤的化疗敏感性降低已无异议，但目前关于放疗后耐药基因及其蛋白表达情况以及相应的放疗对化疗敏感性的影响方面的研究较少,结果也不一致。因此，有针对性地对其研究十分必要。目前含铂方案是nsclc一线标准化疗方案。研究结果证实，ercc1可作为铂类药物化疗效果的独立预测指标[15]。本实验针对体外培养的肺腺癌a549细胞株,检测高能x射线照射前后与顺铂耐药相关的基因——切除修复交叉互补基因1（ercc1）及其编码产物的表达随时间变化情况，探讨照射与肺腺癌a549细胞顺铂耐药性的关系。现将结果报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞培养 　　人肺腺癌细胞株a549由中国科学院上海生物学研究所提供。培养于含有体积分数0.10的小牛血清、10×104u/l的青霉素及10×104 g/l链霉素的rpmi 1640培养液中，置于37 ℃、体积分数0.05 co2及饱和湿度的培养箱中传代培养。待细胞生长至指数生长期时进行x射线照射。 　　1.2 照射方法 　　照射源为直线加速器(varian 23ex，美国)，采用6 mv的x射线，源皮距为100 cm。细胞每次照射剂量为2 gy，每天1次，总剂量10 gy。剂量率为300 cgy/min。射野大小为15 cm×15 cm。把培养瓶置于照射野中心，每次照射后放回培养箱继续培养，全部照射结束后，每隔1周取对数生长期的细胞冻存，用于rtpcr和sabc法检测，每组实验重复3次。 　　1.3 rtpcr检测ercc1 mrna的表达 　　按trizol试剂盒(购自美国invitrogen公司)说明书及rtpcr试剂盒（购于大连宝生物工程有限公司）说明书的方法提取总细胞rna，反转录合成cdna。ercc1引物序列为：正向引物5′acccctcgacgaggatga3′,反向引物 5′gatggcatattcggcgtaggt3′，扩增片断长度为127 bp。内参照βactin扩增片段长约为621 bp， 引物序列为：前向引物5′acactgtgcccatctacgagg3′， 反向引物5′agggccggactcgtcatact3′。上述ercc1及内参照βactin引物均由上海生工生物工程有限公司合成。