黄芩苷对人外周血T细胞TCR Vβ mRNA表达的影响的论文.docVIP

　　黄芩苷对人外周血T细胞TCR Vβ mRNA表达的影响的论文 作者：龚淑琪，傅颖媛，孙午，姜青龙，舒奇 【摘要】 目的研究黄芩苷对人外周血t细胞表面tcr vβ mrna表达的影响及其可能受体。方法采用尼龙毛柱法分离t淋巴细胞，将其分为空白对照组（t1）、黄芩苷组（t2）、抗体封闭用药组（t3）、抗体封闭对照组（t4），37℃培养48h，trizol法提取总rna，实时荧光rt-pcr法检测各组tcr vβ mrna表达。结果t2组较t1组tcr vβ mrna的表达明显增强（p﹤0.01）；t3组较t2组tcr vβ mrna的表达明显减低（p﹤0.01）；t3组较t4组tcr vβ mrna的表达增高（pgt;0.05）。结论黄芩苷能显著增加t细胞表面tcr vβ mrna的表达；t细胞受体（tcr αβ）是黄芩苷作用于t细胞的主要受体之一。 【关键词】 黄芩苷； t细胞受体； tcr vβ mrna； 实时荧光rt-pcr abstract：objectiveto study the effect of baicalin on the mrna expression of tcr vβ on the surface of human peripheral blood t cells and explore the possible receptor for baicalin.methodst cells n method, and diuided into four groups: blank control group(t1), baicalin group(t2), antibody blocking 4 drug group(t3) and blocking control group(t4). after incubation for 48 h, the tcr vβ mrna expression in different groups e fluorescent rt-pcr. results1.the tcr vβ expression of t2 group prove the tcr vβ expression significantly and the tcr αβ is one of the major receptors for baicalin 　　key rna; real-time fluorescent rt-pcr 　　黄芩是一种唇形科多年生草本植物的干燥根，作为药用已有上千年的历史，其味苦、性寒，具有清热解毒、凉血止血、除热安胎的功效。.其主要活性成分黄芩苷（分子式c21h18o11、分子量446.35）是一种黄酮类化合物，研究发现黄芩苷具有抗病毒［1］，抗炎症［2］，抗肿瘤［3］及免疫调节的作用［4］。其中对黄芩苷免疫调节机制的研究，尤其是抗病毒、抗肿瘤方面的免疫调节机制已成为学者们关注的热点问题之一，但目前的研究大多局限于细胞水平。本实验在本室既往摸索的黄芩苷最佳体外作用浓度及促进t、b细胞体外增殖研究的基础上，从黄芩苷对tcr vβ mrna表达的影响入手，结合抗体封闭技术，试图从分子水平上探索黄芩苷作用t细胞表面的可能受体。 　　1 材料与仪器 　　1.1 细胞及药品人外周血浓缩白细胞购自江西省血液中心，黄芩苷由江西省中医药研究所提供（纯度＞98%）。 　　1.2 试剂及仪器鼠抗人tcr（αβ）单克隆抗体（美国bd公司），revertaidtm first strand cdna synthesis kit（mbi 公司），trizol试剂、sybr green qpcr试剂盒（北京全式金生物技术有限公司），myiq实时荧光定量pcr仪（美国bio-rad公司）。 　　1.3 qpcr引物由primier primer 5.0 软件设计，上海生工生物工程有限公司合成。以β-actin（β-肌动蛋白）为内参基因，序列如下： tcrvβ (xm_001716513) 141bp for_001101) 128bp forc，再利用玻璃贴壁法去除单核细胞，最后将收集的淋巴细胞用尼龙毛柱法分离t细胞。洗涤收集的t细胞，用0.2%台朌蓝染色计数细胞活率（≥95%），补体依赖细胞毒实验（cdc）鉴定t细胞纯度（≥90%），最后调整细胞浓度为5×106/ml。 　　2.2 实验分组按表1分组加样后转种于24孔板上，置37℃ 5%co2箱培养48 h。表1 t细胞分组加样表（略） 　　2.3 总rna提取及鉴定①利用trizol试剂提取总rna。②100v、1%琼脂糖凝胶电泳观察总rna完整性。③紫外分光光度计测定od260/od280，在1.80～2.0之间，说明纯度较好，并