黄芪香丹红花注射液对间充质干细胞增殖的影响的论文.docVIP

　　黄芪香丹红花注射液对间充质干细胞增殖的影响的论文 【摘要】 目的研究黄芪香丹红花注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells， mscs)增殖的影响。方法体外加药培养mscs，用四甲基偶氮唑法检测黄芪香丹红花注射液促进大鼠mscs的增殖作用，免疫组化检测mscs细胞的5溴尿嘧啶核苷(brdu)标记阳性率。结果发现香丹药液对mscs的增殖与对照组比较有显著性差异;而红花、黄芪药液对mscs的增殖无显著作用。结论香丹注射液有促进mscs增殖的作用。 【关键词】 黄芪注射液； 红花注射液； 香丹注射液； 骨髓间充质干细胞； 细胞增殖 　　abstract：objectiveto investigate the effect of astragali，flos carthami， salvia miltiorrhiza injection on the proliferation of mesenchymal stem cells. (mscs).methodsmscs of the 3th generation scs arked by brdu. the proliferation of mesenchymal stem cell tt and immuno  cytochemistry. resultsin salvia miltiorrhiza group，mscs proliferation in three higher concentration groups of five increased pared i groups(pgt; 0. 05) in vitro.conclusionsalvia miltiorrhiza can improve proliferation of mscs. 　　key i； astragali； salvia miltiorrhiza injection； mesenchymal stem cells； cell proliferation 骨髓间充质干细胞（mscs）已成为组织工程、细胞治疗、基因治疗等方面的研究热点，具有取材方便、体内可以随血液循环到受损伤部位参与修复损伤的优点 ［1，2］。.我国中药有近两千年的历史，资源丰富，在这些中药中可能有大量的能够促进干细胞增殖、分化的药物。黄芪、红花、香丹均是具有活血化淤，通脉养心、抗凝、扩血管、改善微循环、抗氧化等功效的中药。为了探讨活血化淤、通脉养心类中药对干细胞增殖的影响，本研究组通过体外实验研究了几种单味中药对骨髓间充质干细胞增殖的影响。现报道如下。 　　1 材料与仪器 sd大鼠(青海地方病实验动物中心) 。淋巴细胞分离液(上海试剂二厂) ；l dmem(gibcobrl公司) ；胰蛋白酶(sigma公司) ;四甲基偶氮唑(mmt) 、5溴尿嘧啶核苷(b rdu) 、二甲基亚砜(sigma公司) ；黄芪注射液（成都地奥九泓制药厂，批准文号，红花注射液（太原华卫药业有限公司，批准文号，香丹注射液(四川川大华西药业股份有限公司，批准文号 。生物素山羊抗大鼠igg(博士德二抗试盒) ；dab显色剂(博士德生物工程有限公司) 。酶标仪(美国) 。 　　2 方法 　　2.1 大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养取体质量200 g sd大鼠的股骨和胫骨，用dmem冲出骨髓。将冲出的骨髓和dmem混合液离心(1. 5 ×103 r·min- 1) 5 min，去上清液后，用dmem制成悬液。用吸管沿管壁将悬液慢慢加入已装有4 ml分离液的离心管中，使两种溶液间有明显的界面， 1.9 ×103 r·min- 1水平离心20 min。用吸管小心吸取中层白色雾状的细胞层，无血清dmem液洗涤两次，然后用含15%小牛血清的dmem培养液重悬， 5 ×105·ml- 1接种， 37℃、5%co2 孵箱培养。第5天，第1次换液，此后每7 d换液两次。 　　2.2 加药培养待细胞接近融合时，按1 ×104·ml- 1传代，传至第3代时，将细胞浓度调为2 ×105·ml- 1 ，接种于96孔板(每孔100 μl) ，培养24 h；吸去上清液,每孔加不含血清的dmem溶液100 μl，培养24 h；吸去上清液，每孔加100 μl含15%小牛血清的dmem培养液，同时分别加入黄芪、红花、香丹注射液(药物浓度梯度为：原液，5，10，15，20倍液）每孔70 μl，每个浓度3个重复孔。3个阴性对照孔加等量的生理盐水，培养24，48 h，用mtt法检测3种注射液和生理盐水对细胞的增殖作用。 　　2.3 mtt检测24，48 h后，吸去培养液，每孔加20μlmtt溶液