黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究.docVIP

　　黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究 作者：尹兵祥马喜桃蔡义勇扈晓宇钟森 【摘要】目的观察黄连解毒汤对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的 治疗 作用及中药的量效关系。方法32只SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常组，模型组，黄连解毒汤低剂组，高剂组；除空白组外，其余各组均以1000mg/kgD-Galn腹腔注射造模，空白组则以等量NS腹腔注射；造模后立即对中药组给予相应浓度中药10ml/kg灌胃，每日一次，余组则以等量NS灌胃。染毒24h后，股动脉取血，测血清ALT,AST,并解剖肝脏，光镜下观察其病理变化，操作同前。结果模型组与正常组相比，模型组ALT、AST活性明显增高；治疗组与模型组相比，治疗组转氨酶活性降低，差异有统计学意义（均p＜0.05）；两治疗组间相比，转氨酶活性差异无统计学意义。肝脏病理组织学检查显示，治疗组肝细胞坏死及炎细胞浸润程度均较模型组减轻。结论对1000mg/kgD-Galn诱导的大鼠急性肝损伤，黄连解毒汤干预24h后，有一定的治疗作用。 【关键词】黄连解毒汤急性肝损伤D-氨基半乳糖胺量效关系 黄连解毒汤方出自《肘后备急方》，名见《外台秘要》，由黄芩、黄连、黄柏、栀子四药组成，有清热燥湿、泻火解毒的功效，主治三焦火毒证，尤其对热毒炽盛证型的急性肝炎，有一定的临床效果[1]。有学者已对该复方进行了研究[2]，但为预防性研究，与临床实际应用有一定的差距。本实验重点观察该方对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1药物：D-氨基半乳糖（D-galactosanine,D-Galn）由sigma公司提供，批号7499531，黄连解毒汤的四味药材为中药免煎剂型，购自成都中医药大学附属 医院 中药房，各药物的剂量比遵守《肘后备急方》原方比例，以蒸馏水煮沸冲为不同浓度的中药汤剂，其中低剂量组(T1组)浓度为0.49g/ml，高剂量组（T2组）浓度为0.99g/ml。 1.1.2动物：清洁级SD大鼠32只，体重200±20g，雌雄各半，由四川大学华西动物实验中心提供,饲养于成都中医药大学附属医院病理生理实验动物中心， 自然 明暗周期，室温21～23℃。 1.1.3主要试剂：肝功ALT、AST试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，批号080211，10%福尔马林缓冲液由华西医科大学药理实验室提供。 1.1.4仪器：KDC-2046低速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），Sartorius,R180-D 电子 分析天平，日立7170全自动生化分析仪，LEicaDM4000型显微图像分析系统。 1.2方法 1.2.1动物分组及给药量 清洁级SD大鼠32只，雌雄各半，适应性喂养3天后，称重编号。随机分为4组，每组8只，即正常组（C组）、肝损伤模型组（M组，1000mg/kgD-Galn）黄连解毒汤低剂量组（T1组，0.49g/ml，临床等效剂量）、黄连解毒汤高剂量组（T2组，0.99g/ml，2倍临床等效剂量）。 1.2.2操作过程： 试验前一天对大鼠称重，禁食不禁水。实验前D-Galn以无菌NS配制为10%的浓度，根据 离心取血清，全自动生化分析仪以连续监测法检测血清ALT,AST，肝脏病理则送四川大学华西医学中心药理实验室常规方法制作HE切片，以LEica显微图像分析系统，以200×的放大率观察。 1.2.3统计方法 据SPSS13.0统计分析，数据以x-±s表示，采用Dunt’s检验，α＝0.05。 2结果 2.1对血清ALT、AST的影响：24h时，两 治疗 组均有降低血清转氨酶的作用，差异有统计学意义（P＜0.05）。 2.2肝组织病 理学 影响 光镜下观察，C组：肝索排列整齐，小叶结构完整，肝细胞无变性坏死。M组：肝索排列欠齐，肝细胞脂肪样变，点状坏死，血窦内充血，小叶内广泛炎性浸润。T1组:肝索排列整齐，肝细胞少量变性，血窦内少量充血，小叶内点灶状炎性浸润。T2组：肝索排列较齐，肝细胞脂肪变性明显，血窦内少量充血，散在炎症浸润，与T1组无明显差别。 3讨论 急性肝损伤是由多种病因引起并有多种因素参与的复杂过程，也是是所有肝病慢性化的始动因素。急性肝损伤,特别是急性重型肝炎,发病急,进展迅速, 现代 医学对此尚无特效治疗。中医学认为其发病主要和热毒有关，热毒炽盛，加以湿邪秽浊之气，凝胶成痰，或热毒深入营血而导致诸种症状发生。黄连解毒汤便是清热解毒，清热除湿的代表方[1]。方中选用大苦大寒的黄连为君，清泻心火及中焦之火，臣以黄芩以清上焦之火，佐以黄柏清下焦之火，栀子清三焦之火，导热下行，引邪从小便出。四药合用，苦寒直折，清热解毒，泄浊退黄。 D-Galn是一种间接肝毒剂，主要通过干扰肝细胞内UTP代谢，影响