黑芝麻提取物促B16黑素瘤细胞黑素合成及其机制的研究的论文.docVIP

　　黑芝麻提取物促B16黑素瘤细胞黑素合成及其机制的研究的论文 作者：姜泽群，徐继敏，吴琼，何光源 【摘要】 目的 研究黑芝麻的水提取物对b16黑素瘤细胞系酪氨酸酶活性、黑素合成及相关基因和蛋白表达的影响，探讨黑芝麻促进黑色素合成的可能机制。方法选择3种浓度(0.5,1,2 mg/ml)的黑芝麻水提物作用于b16黑素瘤细胞72 h，观察其对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。免疫印迹法和半定量逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)分别检测药物作用48 h前后酪氨酸酶(tyrosinase)、小眼相关转录因子(microphthalmia associated transcription factor，mitf)，酪氨酸酶相关蛋白酶1(trpl)和酪氨酸酶相关蛋白酶2(trp2)蛋白和mrna表达水平的变化。结果3种浓度的黑芝麻水提物可轻微促进b16细胞的增殖(pgt; 0.05);试验浓度范围内可明显促进b16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性增加( plt; 0.05)，并以浓度依赖方式促进酪氨酸酶和mitf的蛋白和mrna表达( plt; 0.05)，但对trp-1、trp-2的表达几乎没有影响(p gt; 0.05)。结论黑芝麻水提物在体外能直接刺激b16黑素瘤细胞黑色素的合成，上述变化可能通过促进酪氨酸酶和mitf的基因转录和蛋白表达作用来完成。.cOm 【关键词】 黑芝麻水提物; 酪氨酸酶(tyrosinase); 黑素; 小眼相关转录因子(mitf); 酪氨酸酶相关蛋白酶1(trpl); 酪氨酸酶相关蛋白酶2(trp2) 　　abstract：objectiveto study the effect of semen sesami nigrum (elanogenesis of b16 murine melanoma cells and to clarify the mechanism of its stimulating effect on melanogenesis.methodsthree different concentrations of elanin content，tyrosinase activity easured. the protein and mrna expression of melanogenesis key enzymes ent of ental dose，elanin content significantly in a dose-dependent manner( plt; 0.05). the increasing mrna and protein expression of tyr and mitf anner( plt; 0.05).almost no effect ulate melanogenesis in b16 melanoma cells, ay be induced by increasing expression of tyr and mitf on mrna and protein levels. 　　key semen sesami nigrum; tyrosinase; melanin; microphthalmia associated transcription factor(mitf); tyrosinase-related protein-1(trpl); tyrosinase-related protein-2(trp2) 　　黑芝麻是我国传统的滋补食品，有显著的医疗保健功效。早在几千年前的《本草纲目》中对黑芝麻的功效就有描述：补肝、益胃、精血、润肠、生津、明目、乌发、降压。近年来有研究表明黑芝麻对酪氨酸酶的激活及促黑色素生成方面均具有较强的作用[1,2]，但其分子机理尚不清楚。本实验通过检测黑芝麻水提物对细胞的增殖活性、黑素含量及酪氨酸酶活性的影响，并进行黑素合成的相关基因(tyrosinase/mitf/trp-1/trp-2) mrna和蛋白质表达的测定，从细胞和分子水平上探讨黑芝麻促进黑色素生成的作用机制及对白发治疗的可能性。 　　1 材料 　　1.1 试剂 左旋多巴(l-dopa)，dmso，dmem高糖培养基(美国gibco公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，trizol(invitrogen life technologies)，pcr试剂盒和rt-pcr试剂盒pcr引物购自北京奥科生物技术公司(均购自宝生物大连公司)，多克隆兔抗人酪氨酸酶(tyrosinase)抗体、多克隆兔抗人mitf抗体、多克隆兔抗人酪氨酸酶相关蛋白酶1(trpl)抗体、多克隆兔抗人酪氨酸酶相关蛋白酶2(trp2)抗体和兔抗人肌动蛋白多克隆抗体，