外周血提取DNA和DNA电泳检测.pptVIP

1.取消毒EP管，做好标记，取外周抗凝血（全血）100ul于EP管中，以10000rpm离心1min 。 2.弃上清，加双蒸水200ul溶解，摇匀20s。（破红细胞、白细胞膜） 3.混匀后加6M NaI溶液200ul，缓慢摇匀20s。（破核膜,使DNA从核蛋白中解离） 4.加入氯仿/异戊醇（24﹕1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。  * 实验二十五 真核基因组DNA分离纯化 ─外周血白细胞提取DNA（NaI法） 实验二十五 NaI法提取外周血白细胞 DNA 学时数：3 教学目的:掌握NaI法提取外周血白细胞DNA的原理和方法。 教学重点:实验原理与过程 教学难点:实验原理与方法 使用教具:多媒体 教学方法:互动式、讨论式教学法 讲授内容纲要、要求及时间分配 ?导入：（用一部著名电影导入正题，激发学生探索生命奥秘的兴趣） 1~2 min 交代正题： NaI法提取外周血白细胞DNA 1 min （一）实验目的（简明扼要） 1 min （二）实验原理（提出问题，学生阅读，在问题中理解实验原理） 12~14 min （三）实验材料 3 min （四）实验步骤（思路清晰，结合原理讲解） 15~16 min （五）注意事项 2 min （六）实验报告 1 min 引言：1min　　 美国好莱坞电影《侏罗纪公园》总票房超过3亿美元同时也创造了一种大胆的科学设想：一只蚊子吸取了恐龙的血液，蚊子恰巧又被琥珀完美保存至今日，科学家因此获取了恐龙的DNA，再现了恐龙时代。 真核基因组DNA的分离纯化 回忆理论知识 1.真核生物的核酸类型和分布 2.真核生物DNA的结构 核酸的分离纯化 （一）原则：保证核酸一级结构的完整；排除蛋白质、脂类、多糖等其他分子的污染；无其他核酸分子的污染。 （二）步骤：破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子，沉淀核酸以去除盐、有机溶剂等杂质，最后得到纯化的核酸。 NaI法提取外周血白细胞DNA 实验目的：掌握NaI法提取外周血白细胞DNA的原理和方法。 用NaI法提取白细胞中的DNA可用于Southern杂交、PCR等。 例如做亲子鉴定可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。 1.NaI起什么作用？ 2.如何将DNA从蛋白质中释放出来？ 思考： 实验原理：从全血制备白细胞DNA，可用双蒸水溶胀红细胞及白细胞膜，释放出血红蛋白及细胞核，使核酸处于易提取状态，加NaI破核膜并使DNA从核蛋白中解离，用氯仿/异戊醇抽提使蛋白质沉淀完全，DNA存在于上层水相中，以异丙醇沉淀DNA，离心弃去异丙醇，并重复操作一次，即可获得白细胞DNA。 实验材料 1.器材 （1）高速冷冻离心机。 （2）自动移液器。 （3）枪头、1.5ml离心管（高压灭菌） 2.试剂 （1）6mol/LNaI (2)氯仿/异戊醇（24:1V/V） (3)纯异丙醇（AR） （4）37%异丙醇 （5）双蒸水（高压灭菌） （6）TE缓冲液（PH8.0）高压灭菌 实验步骤 （思考：每个步骤的作用？） *