Ｃ２Ｃ１２成肌细胞体外诱导分化为肌管的论文.docVIP

　　Ｃ２Ｃ１２成肌细胞体外诱导分化为肌管的论文 【摘要】 【目的】 观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞ｃ２ｃ１２向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用，探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】 将ｃ２ｃ１２成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖ｄｍｅｍ培养基培养，收集细胞，在相差显微镜下观察形态变化，并通过免疫细胞化学（ｉｍｍｉｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｉｃｃ）及ｒｔ-ｐｃｒ方法分别检测肌性相关基因表达的改变。【结果】 ①２０ ｍｌ／ｌ和５０ ｍｌ／ｌ的马血清均能促使ｃ２ｃ１２细胞形成肌小管，２０ ｍｌ／ｌ浓度马血清诱导效率最好（第７天时肌小管形成率分别为３１．４％ ± ２．１％和１９．０％ ± １．６％，ｐ ＜ ０．００１）。②２０ ｍｌ／ｌ马血清诱导３～４ ｄ开始有肌管形成，之后肌管越来越多，到８～９ ｄ达高峰（第９天４０．２％ ± １．３％），往后细胞逐渐衰老死亡。③２０ ｍｌ／ｌ马血清诱导ｃ２ｃ１２细胞向成熟肌细胞分化过程中，肌相关蛋白分子表达发生变化：结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ）、成肌分化抗原（ｍｙｏｄ）、生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）和肌球蛋白（ｍｙｏｓｉｎ）等表达逐渐增强（未刺激时分别约为４９．６％ ± １．１％、２３．４％ ± １．１％、４．８％ ± １．６％和２．６％ ± １．５％；第６天时分别提高为８０．４％ ± １．８％、８５．４％ ± １．１％、２２．２％ ± １．１％和２６．０％ ± １．６％；ｐ ＜ ０．００１）；ｄｅｓｍｉｎ、ｍｙｏｄ和ｍｙｏｇｅｎｉｎ相应的ｍｒｎａ分子也可以通过ｒｔ-ｐｃｒ检测到。.【结论】 ①低浓度的马血清能够有效刺激ｃ２ｃ１２成肌细胞向成熟细胞分化，以２０ ｍｌ／ｌ浓度效果最好；②ｃ２ｃ１２细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板；③肌分化发育过程比较复杂，许多因素都可能起影响，研究设计要尽量标准化。 【关键词】 成肌细胞； 肌细胞； 肌管； 定向分化； 基因表达 ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃ２ｃ１２ ｍｙｏｂｌａｓｔｓ ｉｎｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｔｕｂｅｓ ｃｈｅｎ ｙｏｎｇ-ｌｅ１， ｚｈｏｕ ｇｕａｎｇ-ｑｉａｎ２， ｄｅｎｇ ｙｕ-ｂｉｎ１， ｚｈｉ ｗｅｉ２， ｘｉｅ ｈｕｉ-ｑｉ２， ｄｅｎｇ ｌｉ２， ｙａｎｇ ｚｈｉ-ｍｉｎｇ２， ｗａｎｇ ｙａ-ｚｈｕ１ （ １． ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｔｈｏｌｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， ｓｕｎ ｙａｔ-ｓｅｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｓｃｈｏｏｌ， ｓｕｎ ｙａｔ-ｓｅｎ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８９， ｃｈｉｎａ； ２． ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｈｕａｘｉ ｈｏｓｐｉｔａｌ， ｓｉｃｈｕａｎ ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００４１， ｃｈｉｎａ ） ａｂｓｔｒａｃｔ： 【ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｈｏｒｓｅ ｓｅｒｕｍ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃ２ｃ１２ ｍｙｏｂｌａｓｔｓ ｉｎｔｏ ｍａｔｕｒｅ ｍｙｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｔｕｂｅｓ， ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ ｍｙｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． 【ｍｅｔｈｏｄｓ】 ｔｈｅ ｃ２ｃ１２ ｍｙｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ-ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｍｅｍ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｈｏｒｓｅ ｓｅｒｕｍ， ｔｈｅｎ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ， ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｍｕｓｃｌｅ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｒｔ-ｐｃｒ ａｓｓａｙｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． 【ｒｅｓｕｌｔｓ】 （１）ｂｏｔｈ ２０ ｍｌ／ｌ ａｎｄ ５０ ｍｌ／ｌ ｈｏｒｓｅ ｓｅｒｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｍｙｏｔｕｂｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ２ｃ１２ ｍｙｏｂｌａｓｔｓ， ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ２０