增强型绿色荧光蛋白示踪人膀胱癌细胞裸鼠膀胱腔内种植转移的观察.pdfVIP

中华临床医师杂志(电子版)2016 年 2 月第 10 卷第 3 期 Chin J C1inicians(E 1ectronic Editionl,Februarv 1.2016Yol.l 0.No.~ . 387 . ·基础论著· 增强型绿色荧光蛋白示踪人膀肮癌细胞 裸鼠膀脱腔内种植转移的观察 张超 l 杨德林2 张小德 l 【摘要】 目的 建立能够准确评估成瘤、可视的膀脱癌腔内种植转移动物模型。方法 利用 前期获得的具有高侵袭力和稳定高表达增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) 的单克隆细胞株，培养后通过 膀脱插管的方法灌注裸小鼠膀脱(共 20 只裸鼠)。饲养后于 2h、 24 h、 7d、 2 周、 3 周和4 周时(每 个时间点随机取2 只裸小鼠)，通过体视荧光镜观察成瘤情况。体视荧光镜检测完毕后处死裸鼠，无 菌条件下取出膀脱， PBS 冲洗，并剪碎，膜蛋自酶重悬，摇床上 37 C 振荡过夜，流式细胞仪检测 EGFP 表达量。结果 灌注膀肮肿瘤细胞 2h 和 24 h 后的整体荧光成像系统图像，未见肿瘤生成， 7d 开始有肿瘤逐渐出现，并逐渐增大，到4 周时整体荧光成像系统F肿瘤占据膀脱的大部分，并且 发出很强的荧光。流式细胞仪检测发现灌注膀脱肿瘤细胞 2h、 24 h 后，可检测到的 RGFP 表达量 较少，并且在下降趋势; 1 周之后开始逐渐增加，到 4 周时达 EGFP 的细胞比例为 62.3%和 58.4%。 结论 该模型具有成瘤率高，可以在不处死裸鼠的情况下体外、动态观察肿瘤的生长1 通过流式细 胞仪可以对成瘤情况进行精确评估。其可为膀脱癌腔内种植转移机制的研究提供条件，也为评价和 筛选抗膀脱肿瘤药物提供了较为理想的动物模型。 【关键词】 膀肮肿瘤: 模型，动物; 绿色荧光蛋白质类: 种植转移 Observing human bladder cancer cell implantation metastasis in urinary bladder of athymic mouse J 2 l by green fluorescent protein expression Zhang Chao , Yang Delin , Zhang Xiaode JDepartment 01 Urinaη\ Qujing First People s Hospital, Qujing 655000, China; 2Department 01 Urinary, the Second Hospital 01Kunming Medical Universiσ Kunming 650101, China Corresponding aulhor: Yang Delin , Email: chesanjin@163.com Abstract] Objective To establish a model of human bladder cancer ceIl implantation metastasis in urinary bladder which have high tumorigeness rate and can visualize tumor progression over time in vivo and accuracy. Methods By insti lIed this ce lI line which had high invasive power , high implantation metastasis and expression of EGFP gene into the bladders of 20 athymic mouse to establish