第25章 病毒感染的检查方法与.ppt

病毒感染的检查方法与防治原则 教学要求 （一）掌握 病毒培养的方法；病毒在培养细胞中增殖的指标；CPE的概念。 （二）熟悉 病毒标本采集的方法和原则；病毒分离的方法；病毒血清学检查的方法。 （三）了解 病毒的快速诊断方法；亚单位疫苗和DNA疫苗；抗病毒感染的治疗。 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养* 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） （一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） 病毒的细胞培养 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分离 卵黄囊 嗜神经病毒 3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒 1．病毒增殖鉴定* (1)细胞病变效应*（cytopathic effect, CPE ） ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 红细胞吸附现象 (4)细胞代谢改变* 细胞代谢变慢 pH变化减慢 (5)细胞的病毒标记*:免疫荧光/酶标技术等 (6)病毒核酸*:PCR等 2.病毒形态学鉴定 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大 3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验） 3.病毒血清学鉴定 (2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) ——多种病毒鉴定 4.病毒分子生物学鉴定 抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序 (四) 新病毒的鉴定 核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比 三、病毒感染的血清学诊断 应用： ①采取标本分离病毒为时已晚 ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 ③为证实所分离的病毒的临床意义 ④进行血清流行病学调查等 1.中和试验（neutralizing test） 病毒＋中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用 2.补体结合试验 （complement fixation test） 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。 四、病毒感染的快速诊断 数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM） （一）形态学检查 电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵