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第十五章 分子杂交技术 第一节 核酸杂交的基本原理 1、核酸分子杂交定义： 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把 DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链（heteroduplex）（参照图讲解）。 2、探针技术 2.1 探针 (probe) 定义： 一段常用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在（参照图讲解）。 2.2 探针形式（举例说明） 3、核酸的变性 在物理或化学因素的影响下，维系核酸二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA双螺旋解旋成为单链的过程称为核酸的变性（denaturation）。 变性的DNA粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加。 加热变性是实验室最常用的方法 一般当温度在70℃以内时，DNA几乎不变性； 温度在70～90℃之间时，DNA部分变性； 温度大于90 ℃时，DNA变性使双链打开，温度大于100℃时，DNA双链分离。 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 在热变性过程中，通常将增色效应达一半时即双螺旋被解开一半时的温度称为变性温度或融解温度（melting temperature），用Tm