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- 2017-05-14 发布于湖北
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生化技术自我整理精选
一、生命大分子制备
1、生物大分子的特征:
(1)由结构比较简单的小分子所组成
(2)具有非常复杂的结构
2、生物大分子制备难度:
(1)生物材料的组成极其复杂
(2)许多生物大分子在生物材料中的含量极微,分离纯化的步骤繁多,流程又长
(3)许多生物大分子极易失活,所以分离纯化时一定要选用最适宜的环境和条件
(4)溶液的温度、PH值、离子强度等各种参数综合影响溶液中生物大分子的制备,很难准确估计和判断,个人的实验技术水平和经验对实验结果会有较大的影响。
3、生物大分子制备的通常步骤:
(1)确定要制备的生物大分子的目的和要求
(2)建立相应的可靠的分析测定方法
(3)通过文献调研和预备性实验,掌握生物大分子的物理化学性质
(4)生物材料的破碎和预处理
(5)分离纯化方案的选择和探索
(6)生物大分子制备物的纯度的鉴定。要求达到一维电泳一??带,二维电泳一个点,或HPLC和毛细管电泳都是一个峰
(7)产物的浓缩,干燥和保存
4、蛋白质的分离纯化:
(1)材料获得:天然获得;基因工程手段获得
(2)粗分离:除去大量杂质和杂蛋白,初步浓缩目的蛋白
(3)细分离:常压柱层析:分子筛层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析
(4)鉴定:纯度、浓度、活性
5、蛋白质的结构研究:
(1)一级结构:氨基酸组成分析、末端分析、肽谱分析
(2)二级结构:紫外光谱法、荧光光谱法、园二色性法、红外光谱法、激
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