粗蛋白测定GB-1.docVIP

中华人民共和国专业标准 中华人民共和国专业标准全氮和粗蛋白测定法Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87crude protein━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。1 仪器a. 分析天平:感量0.1mg;b. 凯氏烧瓶;c. 铁架、铁圈、石棉网;d. 煤气灯(或电炉);e. 干燥管、抽气管、橡皮管;f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;g. 粉碎机等。2 试剂与溶液2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂硫酸铜 : 硫酸钾 = 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。2.4 4%硼酸溶液称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。2.5 浓硫酸 (分析纯)2.6 40%氢氧化钠溶液称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。2.7 0.1N盐酸标准溶液量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,每份重约0.17g,称准至0.0002g。分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL,温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 2 滴,然后用待标定的盐酸溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算GN = ━━━━━━ …………………………………… (3)V ×0.05299式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;G——无水碳酸钠之重量,g;V——盐酸溶液之用量,mL;0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g。2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。记下耗用mL数。计算:N NaOH×V NaOH盐酸当量 = ━━━━━━━━ …………………………………(2)25式中:N NaOH——已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;V NaOH——氢氧化钠溶液的滴定量,mL;25——待标定盐酸吸取量,mL。2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N,可根据初标定浓度加水或盐酸,多次标定后最终达到。为操作简便,可使用2.7.2法,最后用2.7.1法标定。3 操作方法3.1 消化准确吸取原样 2mL(或称取固体样品0.5g,称准至0.0002g)。置于干燥的500mL凯氏烧瓶中,加入硫酸铜—硫酸钾混合试剂 5g,浓硫酸 8mL,然后放入通风橱内 (烧瓶口上放置小漏斗),加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失,消化液呈浅绿色后,再继续加热10min左右,一般消化时间不超过30min。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵,借以将腐蚀性气体抽去。3.2 蒸馏冷却后,缓慢加入蒸馏水120mL,使其全部溶解,冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶液35mL及混合指示剂 2滴的250mL锥形瓶中的液面下,然后,沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢氧化钠溶液40mL,玻璃珠 4～5粒或锌粒 1～2粒,迅速连接蒸馏装置,以防氨气逸出。连接好后,检查是否漏气,缓缓摇匀,接通冷却水,加热、蒸馏,使瓶内液体蒸去三分之二停止蒸馏。3.3 滴定将锥形瓶内接收液用0.1N盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。记下耗用mL数。平行试验允许误差为0.2mL。同时做试剂空白试验。4 计算4.1 全氮TN含量计算如下:(V -Vo)×N×0.014TN = ━━━━━━━━━━×100……………………… (3)W式中:V——样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;Vo——试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL;N——盐酸标准溶液当量浓度;0.014——氮的毫克当量;W——样品mL数或g数;TN——样品全氮含量,g/100mL或g。4.2 原料粗蛋白P计算如下:P =6.25TN ………………………………………………(4)式中:P——原料粗蛋白含量,g/100mL或g;6.25——蛋白质中含氮系数;TN——全氮含量,g/100mL或g。━━━━━━━━━━附加说明:本标准由商业部副食品局提出。本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准主要起草人须凤高。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━