ＴＰ－ＥＬＩＳＡ一步法在检测梅毒螺旋体抗体中的钩状效应分析.docVIP

ＴＰ－ＥＬＩＳＡ一步法在检测梅毒螺旋体抗体中的钩状效应分析 　　[摘要] 目的 分析梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP??ELISA)双抗原夹心一步法检测梅毒螺旋体抗体中出现的钩状效应,探讨其对检测结果的影响以及避免措施。 方法 TP??ELISA双抗原夹心一步法检测结果为阴性的10份可疑标本,分别用双抗夹心二步法、稀释法和梅毒特异性抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行梅毒螺旋体特异性抗体检测。结果 10份用TP??ELISA双抗原夹心一步法检测结果为阴性的可疑标本,用双抗原夹心二步法检测时结果全部转为阳性;TPPA检测结果为阳性而且效价均大于1∶1280;标本经倍比稀释后,分别采用TP??ELISA双抗原夹心一步法和二步法进行测定,用一步法在1∶2和1∶4时分别有4例和2例测定结果仍为阴性,稀释度在1∶512范围内检测结果均为阳性; TP??ELISA一步法测定结果的吸光度随着血清稀释倍数的增加,吸光度值逐渐增加达高峰,后吸光度逐渐减小,曲线呈“钟形”;二步法则曲线在开始的时候维持在高值并无太大变化,而后随稀释倍数增加吸光度值逐渐下降,曲线呈倒“S形”。结论 TP??ELISA一步法在检测梅毒螺旋体特异性抗体中存在“钩状效应”,用稀释法或者两步法可以避免该效应。 ?? 　　[关键词] 梅毒螺旋体;钩状效应;酶联免疫吸附试验 ?? 　　文章编号:1003-1383(2009)04-0421-03 　　中图分类号:R 446.61 　　文献标识码:A 　　doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.023?お? 　　 　　梅毒是由梅毒螺旋体(TP)感染引起的疾病,以性传播为主,也可以通过血液及母婴等形式传播。因此,对献血员、产妇、输血患者进行梅毒螺旋体感染的实验室检查具有非常重要的意义。我们选取10份临床可疑标本进行检测,就TP 　　ELISA中的“钩状效应”产生的原因和避免措施进行探讨。 　　 　　材料和方法 　　 　　1.血清标本来源本院住院和门诊病人中临床症状和病史疑似梅毒,血清TP??ELISA一步法检测阴性,TPPA试验检测阳性的标本10例。?? 　　2.试剂和仪器 TP??ELISA梅毒螺旋体抗体检测试剂盒为上海科华生物工程公司生产,TPPA试剂盒由日本富士瑞必欧株式会社提供。酶标仪和洗板机为雷杜公司的RT??6000型和RT3000型。?? 　　3.方法 用TP??ELISA双抗原夹心一步法和二步法分别对样本的原液及稀释液进行检测。一步法按试剂盒说明书操作;二步法用一步法试剂先加血清样本,37℃孵育30分钟,洗板,再加酶标抗体。TPPA检测步骤按试剂说明书进行。 　　 　　结果 　　 　　1.用双抗原夹心一步法检测梅毒螺旋体特异性抗体阴性的10份可疑标本,用二步法检测,结果转为阳性;用TPPA检测也均为阳性,而且其效价均大于1∶1280,见表1。?お? 　　表1 不同检测方法对样本的检测结果 　　标本号TP??ELISA一步法OD值结果 　　TP??ELISA两步法OD值结果TPPA 　　10.056- 0.122+1∶1280 　　20.034- 0.290+ 1∶1280 　　30.028- 0.322+1∶2560 　　40.043- 0.117+1∶2560 　　50.021- 0.671+1∶1280 　　60.045- 0.338+1∶5120 　　70.026- 1.147+1∶1280 　　80.024- 0.416+1∶1280 　　90.063- 0.134+1∶2560 　　100.064- 0.734+1∶2560 　　注:一步法cut??off = 2.1×0.05=0.106;二步法cut??off = 2.1×0.05=0.106;“+”:阳性;“-”:阴性?お? 　　2.分别用双抗原夹心一步法和二步法测定10份经过1∶2,1∶4…… 1∶2048倍比稀释的标本,10份标本各稀释度的吸光度(A)的均值见表2。两种方法测定的吸光度值与血清抗体浓度的关系见图1。用双抗原夹心一步法测定不同稀释度血清,吸光度值随着稀释倍数的增加逐渐升高,达到较高水平后又逐渐下降,曲线变化呈“钟形”;二步法则吸光度值开始维持在高值并无太大变化,而后随稀释度增加而逐渐下降,曲线呈倒“S”形。?? 　　3.TP??ELISA一步法和二步法对不同稀释度血清的抗体检出情况比较 一步法的漏检率呈两极现象。见表3。?お? 　　表2 TP??ELISA一步法和二步法检测不同稀释度血清的吸光度均值 　　稀释度TP??ELISA一步法OD值结果 　　TP??ELISA二步法OD值结果 　　1∶20.012- 1.866+