正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析.pdfVIP

南方农业学报 2011 ,42(7):791-797 }ournal of Sou由ern .Agriculture http://www.nfn严h.ωm 正常猪外周血淋巳细胞cDNA文库构建 及EST初步分析 李晓宁，孙石开，蔡新斌，杨坚，苏丽娟，章 民，李晓泉， 尹珊，李延生，罗廷荣· 扩西大学动物科学技术学院，南宁 530ω5) 摘要:(目的]构建猪淋巴细胞基因文库，初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱，为进一步筛选免疫相关 基因提供平台。[方法]以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与质粒载体连接后转化大肠杆菌.进 一步扩增后，获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合，并进行序列分析和注释。[结果]构建了正常猪 外周血淋巴细胞cDNA文库，获得库容量为L2xl伊 PFUJmL、重组率为93.3%、85%插入片段处于750-双脚 bp的高质量 文库;随机测定11∞条ES毡，经拼接和聚类，获得152条高表达的基因重叠群(Contigs)和619条低表达基因一一单拷贝 的EST( Singletons ) ;经序列比对分析，发现23.3% ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因，75.9% ESTs为与猪没有匹 配的新基因。用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径阁分析，发现丝裂原活化蛋白激酶途径(Mi­ togen-activated protein kinase , MAPK )、钙信号通路、膜岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll-like受体信号通 路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达。 I 结论]大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被 分离和鉴定出来，但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高，且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用。 关键词:猪:外周血淋巴细胞; cDNA文库;表达序列标签(EST) 中国分类号:S828;Q785 文献标识码:A 文章编号:2095-1191(2011)07-0791-07 Construction of cDNA library from normal swine peripheral blood lymphocytes and preliminary analysis of its ESTs LI Xiao-ning , SUN Shi-kai , CAI Xin-bin , YANG Jian , SU Li-juan , ZHANG Min , U Xiao-quan , YIN Shan , LI Yan-she吨， LUO Ting-rong* (College of Animal Science and Technology , Guan萨j University , Nanning 53α)()5， China) Abstract: [Objective ]The experiment was conducted to construct genomic library of s时ne 1严nphocytes and compare 由e gene expression profile of peripheral blood lymphocy怡s with normal swine for screening relative immunity gene. [Method]mRNA was used as the template and transcribed inωcDNA using RT-PCR. After ligation t