6.2基因工程及其应用(共40张PPT).ppt

* * 问题探讨 讨论： 1、把人胰岛素基因“嫁接”到大肠杆菌 中去后与普通细菌有什么不同？ 2、为什么能把人的基因“嫁接”到细菌上？ ①大多数生物的遗传物质都是DNA，且不同生物的DNA分子基本结构是相同的，都遵循碱基互补配对原则 。所以不同的生物DNA可以嫁接。 ②地球上的所有生物共用一套遗传密码，所以一种生物的基因可以在另外一种生物体内得以表达。 3、怎样把人胰岛素基因“嫁接”到大肠杆菌中去？ 第二节 基因工程及其应用 第六章 从杂交育种到基因工程 原理： 操作水平： 结果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人 类所需要的品种。 基因工程：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（基因“剪刀”） ——限制性内切酶 DNA片段的连接工具（基因“针线”） ——DNA连接酶 基因转移工具（基因“运载体”） ——基因进入受体细胞的运载体 　　基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，最少需要以下三种专门工具： 一、基因工程的原理 1、“基因剪刀”——限制性核酸内切酶(简称限制酶) C T T A A G A A T T C G 　　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。 例如:EcoRI限制酶，专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将序列切开。 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 是，会产生相同的黏性末端。 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 　　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端，碱基能够通过互补进行配对。 CTTCATG GAAGTACTTAA GGGATT AATTCCCTAA ACG TGCTTAA AATTCCCATT GGGTAA GGCATCTTAA AATTCCGTAG GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 2、“基因针线”——DNA连接酶 　　连接酶的作用：将脱氧核糖和磷酸交替连接的DNA骨架的缺口“缝合”。 CTTCATG GAAGTACTTAA GGGATT AATTCCCTAA GGCATCTTAA AATTCCGTAG 连 接 酶 连接的部位： 生成磷酸二酯键 A A T T G C C T T A A G 连接磷酸二酯键 不同点： 连接酶：将DNA片段间互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 DNA聚合酶和DNA连接酶有何异同点？ 聚合酶：以一条DNA为模板，将一个一个核苷酸连接起来 相同点：都是通过形成磷酸二酯键连接起来 思考：如何将重组DNA分子送入受体细胞呢？ 3、基因的运载体 　　科学家发现大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌等的质粒能同时满足以上三个要求。 运载体必须同时满足三个要求： 　①能在宿主细胞内复制并稳定的保存。 　②具有多个限制酶切点。 ③具有某些标记基因，便于筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 种类：质粒、噬菌体、动植物病毒 基因的运输工具——质粒 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有限制酶切割位点 有标记基因的存在 最常用的运载体——质粒 分布：存在于许多细菌以及酵母菌等生物中。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒。 本质：细胞染色体(或拟核)外能自主复制的小型 环状DNA分子。 质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。 5、基因工程的操作步骤： 从细菌中取出质粒 从细胞中取出DNA 用同种限制酶切断两个DNA 具有相同的黏性末端 提取目的基因（如人的胰岛素基因） 用连接酶将目的基因与质粒连接 （形成重组DNA分子） 目的基因与运载体结合 将目的基因导入受体细胞（如大肠杆菌） 利用质粒中具有某些特性的基因进行检测并判断目的基因是否表达 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 ①从细胞中分离出DNA ①