培训课件：菌落总数的测定GB47892-2010-.pptVIP

五?菌落总数的报告方法 1、菌落数在 100CFU时，按四舍五入原则修约，以整数报告。 2、菌落数≥ 100CFU时，第3位数字按四舍五入修约后，取前面两位有效数字，后面用0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按四舍五入原则修约后，采用两位有效数字。 3、若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 4、 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 5、称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。  记录方式 样品 稀释液及 菌落数 选择稀释度 报告(CFU/g,ml) 10-2 10-3 10-4 样品名称 原始数据 计算公式 报告 平均 报告方式 编号 菌落总数 报告方式 单位 1 95.5 96 CFU/g,或CFU/ml （CFU大写） 2 1680 1700或1.7*103 3 均为蔓延菌落无法计数 报告“蔓延菌落” 4 空白对照有菌 结果无效 六、注意事项 1、无菌操作 操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。 2、采样的代表性 如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。 3、稀释液 样品稀释液主要是灭菌生理盐水，或磷酸盐缓冲液，后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。 4 检样稀释： 4.1检样稀释时，应以无菌操作称取或量取有代表性在样品25g（25mL）置225mL灭菌稀释液中。固体样品应剪碎，以拍打式样品处理器做成样品悬液（1：10）。 4.2根据食品卫生标准和对样品污染情况的估计，再进行10倍递增稀释。注意每递增稀释一次，必须另换1支吸管，以保证样品稀释倍数的准确性。 4.3从吸管筒内取出灭菌吸管时，注意不要将管尖碰到手或其他沾污物可能触及的部位。（如玻璃瓶口、试管品、仍留在容器内的吸管的外露部分）。 4.4进行稀释时应注意取样的准确性。（如：吸入液体时应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将液体放至所需刻度。放液体时，不要让吸管接触稀释液的液面，可沿管壁放入，避免吸管外粘附的食品残渣进入稀释液体中）。 5培养基倾注的温度与厚度 培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。 a倾注的温度：46℃ ±1 ℃左右（水浴内保温），温度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡，影响细菌生长，过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。 b倾注的厚度：直径9cm的平皿一般要求15~20mL培养基，一般以15ml较为适宜。 平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。若培养基太薄，在培养过程中还可能因水分蒸发而影响细菌的生长。 倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。 6、为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。 7、培养温度一般为37℃（水产品的培养温度，由于其生活环境水温较低，故多采用30℃）。培养时间一般为48h，有些方法只要求24h的培养即可计数。培养箱应保持一定的湿度，琼脂平板培养48h后，培养基失重不应超过15％。 8、为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细菌菌落发生混淆，不易分辨，可同时作一稀释液与琼脂培基混合的平板，不经培养，而于4℃环境中放置，以便计数时作对照观察。 9、培养条件 一般样品36℃±1℃/48h±2h。水产品（指原生态、未加工水产品）30℃±1℃/72h±3h 10、必须做空白对照： 检测培养基、平皿、稀释液的无菌程度。同时应在工作台内打开一块空白PCA（其暴露时间应于检样时间相当），以了解样品在检验过程中有无收到来自环境的污染。 11、如样品（干调、面粉、脱水蔬菜）中可能含有在琼脂表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂表面再覆盖一层（4ml）培养基。 12、样品稀释液有时会带有细碎的食物颗粒（如奶粉、坚果），为避免这些颗粒与菌落发生混淆，可将样品稀释液与PCA混合，单做培养，置于4度放置同样时间，以便在计数时作为对照。 十、思考 1、?什么是细菌菌落总数（cfu）？2、细菌菌落总数测定的卫生学意义是什么？ 3、倒培养基后，为什么要倒置培养？ 4、为什么营养琼脂培养基在使用前要保持在46±1℃的温度？ 谢谢! 食