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第二章 生物工程概述 克隆子的筛选和鉴定 受体细胞经转化或转导处理后,真正获得目的基因并能有效表达得克隆子一般来说只是一小部分.为了从处理后的大量受体细胞中分离出真正克隆子必需进行筛选和鉴定,其方法有以下几种: 1、利用克隆载体携带的选择标记基因筛选克隆子 抗菌素抗性基因: Ampr Cmpr Kanr Tetr Strr 乳糖操纵子LacZ’基因 2、利用双酶切片段重组法初筛克隆子 3、利用报告基因筛选克隆子 4、克隆子的进一步鉴定 限制性内切酶粉析法 分子杂交法（斑点杂交法 southern杂交法） PCR法 DNA测序法 目的基因转录产物检测 目的基因翻译产物的检测 烟草原生质体与肿瘤农杆菌共培养和选择转化愈伤组织和芽的步骤图 烟草SR1芽 叶原生质体（三天龄） 肿瘤农杆菌 10g阶段培养 K3培养基加荷尔蒙混合培养 105pps/ml 107细菌/ml 室温，32小时 离心和洗涤细菌 培养在加荷尔蒙和抗生素 转入不加荷尔蒙K3培养基 转化的SR1愈伤组织 不加入荷尔蒙的固化LS培养基 转化的SR1芽 概念：运用细胞学技术，在细胞水平上有计划的改造细胞遗传结构、培育人们所需要的动、植物品种或具有某些