黄酮标准曲线绘制的实验报告.docVIP

黄酮标准曲线绘制的实验报告 1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁 标准品 硝酸铝 国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠 国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠 国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇 国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子 采摘于海南大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 1.3.1准备工作及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,CaiDai,2011）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。 序号 浓度（ug/ml） 吸光度 1 0 0 2 15 0.180 3 30 0.349 4 45 0.546 5 60 0.727 6 75 0.884 7 90 1.063 表1-1： 芦丁标准曲线测定数据 图1-2：芦丁标准曲线 1.3.5样品的测试 根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液， 取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。经换算后得样品中总黄酮含量。 样品总黄酮含量(mg/g)=X*n*V1/( V *W) 式中：X—测出的浓度，mg/ mL;（直接代入，不用换算。） n—稀释倍数，量纲为1; VI—样液总体积，mL; V—测定时取样体积，mL; W—样品质量，g。 2.总分含量的测定 2.1 实验仪器 ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司; DELA犯O型pH计:上海梅特勒一托利多仪器有限公司; 723可见分光光度计:上海菩华科技仪器有限公司; DK一512型电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司; 容量瓶(250mL，10OmL，25mL)、比色管管(10mL); 烧杯、移液管、吸耳球。 2.2试剂及药品 没食子酸对照品：基准纯，购于上海分析试剂厂，置50℃真空干燥箱真 空中干燥4 h。乙醇为工业级，蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 2.3 Folin—Ciocalteu比色法测定总酚酸含量 3.3.1 Folin—Ciocalteu试剂的配制 称取20 g钨酸钠和5 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用140 ml蒸馏水溶解，加入10ml 85％的磷酸溶液和20 ml浓盐酸，文火回流10 h，然后加入3 g硫酸锂及15 ml双 氧水，加热沸腾15 min至亮黄色，不得带微蓝和绿色。冷却，移入250 ml容量瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4℃冰箱保存。 2.3.2对照品溶液制备 准确称取15．00 mg干燥的没食子酸，加蒸馏水适量，超声溶解，放冷，以蒸馏水定容至50ml，制成0.3mg/mL没食子酸的溶液，作为对照品溶液。 将0.3mg