非洲马瘟间接ELISA方法的建立及初步应用.pdfVIP

动物医学进展，2012 ， 33(3) :6-9 Progress in Veterinary Medicine 非洲马瘟间接 ELISA 方法的建立及初步应用 / 曹琛福1 ， 2 ，叶奕优1 ， 2 ，宗 卉1 ， 2 ，张彩虹l ， 2 ，吕建强l ， 2 ，杨俊兴1·2 ，花群义1.2 (1.深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室，广东深圳 518045; 2. 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，广东深圳 518045) 摘 要:为建立检测非洲马瘟间接酶联免疫吸附试验方法，利用重组杆状病毒感染昆虫细胞表达出具有 良好抗原性的 VP7 蛋白，将感染 VP7 重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液作为包被抗原，通过优化包被抗原浓 度、二抗稀释度等，建立了检测非洲马瘟的间接 ELISA 方法，并进行了初步运用。结果表明，直接利用具核 细胞表达 VP7 蛋白的昆虫细胞裂解液作为包被液可成功建立检测非洲马瘟的间接 ELISA 方法。 关键词:非洲马瘟;间接酶联免疫吸附试验;VP7 蛋白;真核表达 文章编号:1007-5038(2012)03-0006-04 中图分类号:S854.43 文献标识码:A 非洲马瘟(African horse sickness , AHS) 是马 VP7 蛋白在 AHSV 各血清型中高度保守，是病毒主 要的群特异性抗原。 Chuma T 等问和 Maree S 等[6J 属动物的一种急性或亚急性虫媒传染病，呈地方性 和季节性流行，以发热、皮下结缔组织和肺水肿以及 分别用 AHSV-4 和 AHSV-3 的 VP7 蛋白证实其为 内脏出血为特征。病原为非洲马瘟病毒(African AHSV 的群特异性抗原，可检测到九个 AHSV 血清 horse sickness virus , AHSV) ，易感动物为马、斑马 型的抗体，可做为群特异性诊断试剂进行 AHS 的诊 和驴，本病对马属动物危害大，致死率可超过 断。本文是利用 VP7 重组杆状病毒感染昆虫细胞 90 %[IJ 0 世界动物卫生组织(OIE) 将其列为必须报 后，采用真核细胞表达的 VP7 蛋白作为包被抗原， 告的动物疫病，我国也将其列为一类动物疫病。目 建立了检测非洲马瘟的间接酶联免疫吸附试验 前对于非洲马瘟抗体检测的方法主要包括中和试 (iELISA) 方法，为我国自主研发非洲马瘟 ELISA 验、补体结合反应、琼脂凝胶免疫扩散反应、免疫荧 诊断试剂盒奠定基础。 光试验和 ELISA 方法间。但病毒中和试验费时费 1 材料与方法 力，且需要参考毒株、型特异性血清和细胞培养等才 1. 1 材料 能完成;补体结合试验则广泛应用于检测非洲马瘟 非洲马瘟阳性、阴性血清，蓝舌病阳性血清，鹿 病毒群特异性抗体，是 OIE 推荐的检测方法之一， 流行性出血病阳性血清、马传染性贫血症阳性血清、 但也由于耗时费力，加之某些血清的抗补体效应也