第一章酶学与酶工程6~7节.pptVIP

Enzyme Engineering酶工程 第一章 酶学与酶工程 第六节 影响酶活力的因素 第七节 酶的分离纯化 第六节 影响酶活力的因素 一、 酶活力的测定 酶活力（enzyme activity）也称为酶活性， 是指酶催化一定化学反应的能力。 1. 酶活力与酶反应速度 酶活力的大小可以用一定条件下所催化的 某一化学反应的反应速度（reaction velocity）来 表示，两者呈线性关系。 酶反应速度可用单位时间内底物的减少量 或产物的增加量来表示。 2. 酶的活力单位（U，activity unit） 酶活力的大小及酶含量的多少，用酶活力单位表 示，即酶单位（U）。酶单位的定义是：在一定条件 下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需要的酶 量。这样酶的含量就可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂 含有多少酶单位来表示（U/g或U/ml）。 1961年国际酶学委员会规定“国际单位”表示酶活力；一个国际单位（IU）是指在最适反应条件下，1每分钟催化1 μ moL底物转化为产物所需要的酶量。 1972年又推荐一种新的酶活力单位——Katal（简 称Kat）单位。一个katal单位是指在最适反应条件下， 1每秒钟催化1moL底物转化为产物所需要的酶量。 1Kat＝6?107IU，1IU=16.7nKat 3. 酶的比活力（specific activity） 酶的比活力代表酶的纯度，国际酶学委员会规定 比活力用每mg蛋白质所含有的酶活力单位数表示。对 同一种酶比活力愈大，纯度愈高。 4. 酶的转换数：Kcat值 Kcat值以一定条件下每秒钟每个酶分子转换底物的 分子数来表示酶的催化效率。 5. 酶活力的测定方法 （1）分光光度法（spectrophotometry） （2）荧光法（fluorometry） （3）同位素测定方法 （4）电化学方法（electrochemical method） 二、影响酶活力的因素 1.底物浓度 随着酶反应的进行，底物浓度逐渐下降，产物逐渐积累，酶反应速度也会逐渐变小。为了排除底物和产物浓度变化对酶反应速度的影响，人们采用酶反应的初速度作为衡量的指标。 2、酶浓度 在底物浓度饱和的情况下，酶浓度的加倍将导致V0 的加倍，即V0与酶浓度的关系图为直线图形。 3、温度 温度对酶反应速率的影响表现在两个方面，一方面是当温度升高时，与一般化学反应一样，反应速率加快。反应温度提高10℃，其反应速率与原来反应速率之比称为反应的温度系数，用Q10表示，对大多数酶来讲温度系数Q10多为2 ，也就是说，即温度每升高10 ℃，酶反应速率为原反应速率的2倍。另一方面由于酶是蛋白质，随着温度升高，使酶蛋白逐渐变性而失活，引起酶反应速率下降。 在较低的温度范围内，酶反应速率随温度升 高 而增大，但超过一定温度后，反应速率反而下降， 因此只有在某一温度下，反应速率达到最大值，这 个温度就称为酶反应的最适温度（opptimum temperature)。每种酶在一定条件下都有其最适 温度。 4 、 pH 酶的活力受环境pＨ的影响，在一定pＨ下， 酶表现最大活力，高于或低于此pＨ，酶活力降低， 通常把表现出酶最大活力的pＨ称为该酶的最适pＨ （optimum pH) 各种酶在一定条件下都有其最特定的最适pH， 因此最适pH是酶的特性之一。但酶的最适pH不是 一个常数，受许多因素影响，随底物种类和浓度、 缓冲液种类和浓度的不同而改变，因此最适pH只 有在一定条件下才有意义。 pH影响酶活力的原因可能有以下几个方面： （1） 过酸或过碱可以使酶的空间结构破坏，引起 酶构象的改变，酶活性丧失。 （2） 当pH改变不很剧烈时，酶虽未变性，但活 力受到影响。 （3）pH影响维持酶分子空间结构的有关基团解离， 从而影响了酶活性部位的构象，进而影响酶的活性。 5、 激活剂对酶反应的影响 凡是能提高酶活性的物质都称为激活剂 (activator)，其中大部分是无机离子或简单的有机 化合物。作为激活剂的金属离子有K+、Na2+ 、 Ca2+ 、 Mg2+ 、 Zn2+ 及 Fe3等离子，无机阴离子如：Cl- 、 Br- 、 I- 、 CN- 、 PO43- ，氢离子，中等大小的有机 分子以及具有蛋白质性质的大分子物质等都可作为 激活剂。 激活剂对酶的作用具有一定的选择性，即一种 激活剂对某种酶起激活作用，而对另一种酶可能起 抑制作用；有时离子之间有拮抗作用；有时金属离 子间也可互相替代。 第七节 酶的分离纯化 一.分离